Биологические и микробиологические факторы

Скачать 1.27 Mb.

Название	Биологические и микробиологические факторы
страница	2/12
Тип	Документы

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Документы

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 12

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере защиты прав

потребителей и благополучия человека,

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации

___________________ Г.Г. Онищенко

«29» марта 2012 г.

Дата введения: «29» марта 2012 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Порядок организации и проведения лабораторной диагностики

бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального

и федерального уровней
Методические указания

МУК 4.2.3010-12

____________________________________________________________

1. Область применения

1. Настоящие методические указания (далее – МУ) определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, к биологической безопасности проведения работ.

2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации в области охраны здоровья граждан и медицинских организаций независимо от их организационно-правовой формы и формы собственности.

2. Нормативные ссылки
2.1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 29 октября 2007 г. N 720 «О внесении изменений в пункт 5 Положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 22 января 2007 г. N 31».

2.3. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24 февраля 2009 г. N 11 «О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера».

2.4. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17 марта 2008 г. N 88 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней».

2.5. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 7 июля 2009 г. N 415н «Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения».

2.6. Санитарные правила «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности» СП 1.2.036-95.

2.7. Санитарно-эпидемиологические правила и нормы Дополнение № 2 к СанПиН 2.1.3.1375-03 «Гигиенические требования к размещению, устройству, оборудованию и эксплуатации больниц, родильных домов и других лечебных стационаров». СанПиН 3.5.2528-09.

2.8. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)». СП 1.3.1285-03.

2.9. Санитарно-эпидемиологические правила «Санитарная охрана территории Российской Федерации». СП 3.4.2318-08.

2.10. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». СП 1.3.2322-08.

2.11. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». СП 1.3.2518-09. Дополнения и изменения № 1 к СП 1.3.2322-08.

2.12. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». СанПиН 2.1.7.2790-10.

2.13. Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика бруцеллеза». СП 3.1.7. 2613-10.

2.14. Изменения и дополнения № 1 к СП 1.3.1285-03 Санитарно-эпидемиологические правила «Требования к организации работ с аэрозолями микроорганизмов I-II групп патогенности (опасности)». СП 1.3.2628-10.

2.15. Методические указания «Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей». МУ 3.1.7.1189-03.

2.16. Методические указания «Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории». МУ 4.2.2039-05.

2.17. Методические указания «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза». МУ 3.3.2.2124-06.

2.18. Методические указания «Методы контроля бактериологических питательных сред». МУК 4.2.2316-08.

2.19. Методические указания «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». МУ 1.3.2569-09.

2.20. Методические указания «Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чумы, сибирской язвы, холеры, туляремии, бруцеллеза, сапа и мелиоидоза) к антибактериальным препаратам». МУ 4.2.2495-09.

2.21. ГОСТ 9792-73 «Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб».

2.22. ГОСТ 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа».

2.23. ГОСТ 9225-84 «Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа».

2.24. ГОСТ 26809-86 «Молоко и молочные продукты. Общие методы анализа».

2.25. ГОСТ Р ИСО 51448-99 (ИСО 3100-2-88) «Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований».

2.26. ГОСТ Р ИСО 7218-2008 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям».

2.27. ГОСТ Р 51447-09 (ИСО 3100-1-91) «Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб».

2.28. Рекомендации по правилам перевозки инфекционных материалов 2009-2010. WHO/HSE/EPR/2008.10.

2.29. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство/Под редакцией Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева.

2.30. Специфическая индикация патогенных биологических агентов. Практическое руководство. Под редакцией Г.Г. Онищенко. М.: ЗАО «МП Гигиена».
3. Перечень сокращений
Г – гуанин;

ГИСК – государственный институт стандартизации и контроля;

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота;

ДТР – диагностический титр разведения;

ИФА – иммуноферментный анализ;

ЛПС – липополисахарид;

МО – медицинские организации;

м.к. – микробная клетка;

МДа – мегадальтон;

МЕ – международные единицы;

мкм – микрометр;

МПК – минимальная подавляющая концентрация;

МУ – методические указания;

МУК – методические указания по контролю;

МФА – метод флуоресцирующих антител;

ООИ – особо опасные инфекции;

ПБА – патогенный биологический агент;

ПЦР – полимеразная цепная реакция;

РА – реакция агглютинации;

РИФ – реакция иммунофлуоресцении;

РНАт – реакция нейтрализации антител;

РНГА – реакция непрямой гемагглютинации;

РК – реакция Кумбса;

РХ – реакция Хеддльсона;

РА– реакция агглютинации Райта;

СанПиН – Санитарные правила и нормы;

СП – Санитарные правила;

Тб – Тбилиси;

т.п.н. – тысяч пар нуклеотидов;

ФАО – FAO – Food and Agriculture Organization of the United Nations;

Ц – цитозин;

ЦНС – центральная нервная система;

MLVA – мультилокусный анализ вариабельного числа тандемных повторов (VNTR).
4. Общие положения
4.1. Характеристика болезни и возбудителя бруцеллеза
Бруцеллез (Brucellosis) – острая или хроническая бактериальная инфекционно-аллергическая болезнь, общая для человека и животных, которая характеризуется интоксикацией и преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой систем и других органов; затяжным течением, приводящим, как правило, к инвалидизации. Возбудитель бруцеллеза относится к роду Brucella, который входит в группу грамотрицательных, аэробных/микроаэрофильных палочек и кокков согласно схеме идентификации бактерий Берджи, принадлежит к семейству Brucellaceae порядка Rhizobiales класса Alphaproteobacteria. Бруцеллы являются факультативными внутриклеточными патогенами, вызывающими заболевание у большого числа животных и человека. Род Brucella состоит из 10 самостоятельных видов, различающихся по биохимическим, метаболическим, антигенным и вирулентным характеристикам: Brucella melitensis (3 биовара; преимущественно поражает коз и овец, возможна миграция на крупный рогатый скот и свиней), B. abortus (7 биоваров; вызывает аборты и орхиты у крупного рогатого скота), B. suis (5 биоваров; поражает свиней, зайцев, северных оленей, грызунов), B. neotomae (выделяется от пустынной кустарниковой крысы), B. ovis (вызывает эпидидимиты и орхиты у баранов, B. canis (поражает собак). Вновь зарегистрированные бруцеллы: B. ceti выделяются от китообразных, B. pinnipedialis – от ластоногих, B. microti – от серой полевки, B. inopinata – источник не установлен. Заболевания людей преимущественно вызывают B. melitensis, B. abortus и B. suis биовары 1-4, реже – B. canis.

Бруцеллез у людей протекает в виде системного поражения с вовлечением в процесс многих органов и систем и широким спектром симптомов. Болезнь начинается, как правило, с острой лихорадки с неспецифическими гриппоподобными проявлениями, склонна к хронизации и появлению осложнений в виде артритов, спондилитов, эндокардитов, менингитов, нейропатии, васкулитов, нефритов, лимфоаденопатии.

В соответствии с Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем (Десятый пересмотр. – Женева, 2003 г. МКБ-10) различают следующие формы бруцеллеза (A23):

A23.0 Бруцеллез, вызванный Brucella melitensis

A23.1 Бруцеллез, вызванный Brucella abortus

A23.2 Бруцеллез, вызванный Brucella suis

A23.3 Бруцеллез, вызванный Brucella canis

A23.8 Другие формы бруцеллеза

A23.9 Бруцеллез неуточненный

Большинство случаев заражения людей бруцеллезом происходит при непосредственном контакте с инфицированными животными, или при употреблении в пищу молочных продуктов, контаминированных бруцеллами. Бруцеллы обладают высокой инвазивностью и могут проникать через неповрежденные слизистые покровы, относятся к внутриклеточным паразитам, размножаются в полиморфно-ядерных лимфоцитах и макрофагах, но могут также находиться вне клетки.

Больной бруцеллезом человек, как источник инфекции, опасности практически не представляет, однако, отмечались редкие случаи инфицирования при пересадке костного мозга, переливании крови и половым путем.

Бруцеллы всех видов мало отличимы друг от друга по морфологическим признакам. Это микроорганизмы шаровидной, овоидной или палочковидной формы, расположены одиночно, парами, короткими цепочками, небольшими скоплениями. Спор не образуют, неподвижны. Окрашиваются всеми анилиновыми красителями, грамотрицательны.

Геном В. melitensis, В. abortus, В. ovis, В. neotomae и В. suis биовара 1 представлен двумя кольцевыми молекулами ДНК размером 2100 т.п.н. и 1500 т.п.н. Оба репликона определяют метаболические и репликативные функции и, следовательно, являются хромосомами, а не плазмидами. В. suis биоваров 2 и 4 имеет две хромосомы размером 1850 т.п.н. и 1350 т.п.н., а В. suis биовара 3 – одну хромосому размером 3100 т.п.н. С хромосомой интегрированы фрагменты фаговой ДНК и мобильные генетические элементы - транспозоны. Молекулярная масса ДНК возбудителя бруцеллеза составляет 2,37×10³ МДа, с содержанием пар ГЦ 58-59 %. Плазмид у бруцелл не обнаружено.

Наиболее изучены геномы В. melitensis, В. abortus и В. suis, которые очень близки по структуре, организации и нуклеотидным последовательностям (гомология составляет более 99 %).

Основные факторы патогенности бруцелл: эндотоксин; фермент агрессии гиалуронидаза, низкомолекулярные протеины, ингибирующие фагосомо-лизосомальное слияние.

Бруцеллы нуждаются в сложных обогащенных питательных средах, характеризуются замедленным ростом, особенно в первых генерациях (5-10, а иногда 20-30 сут.). Стимулирует рост добавление нативной сыворотки крови, крови или 1%-5 % глицерина. Оптимальные условия роста – рН 6,8-7,2, температура – 35-37 ^оС. Аэробы. B. ovis и первые генерации отдельных биоваров B. abortus при культивировании испытывают потребность в углекислоте (10-20 %).

Биохимическая активность бруцелл сравнительно невысока. Они расщепляют D-рибозу, аланин, глутамин, аспарагин; некоторые штаммы гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака. Продуцируют уреазу (уровень ее продукции значительно колеблется в зависимости от вида возбудителя), липазу и амилазу (активность которых у возбудителя вида B. suis в 4-5 раз выше, чем у B. abortus и B. melitensis), каталазу, гиалуронидазу. Бруцеллы обладают адениндезаминазной активностью, которая в наибольшей степени выражена у представителей вида B. suis.

Для дифференциации бруцелл используют способность некоторых биоваров вырабатывать сероводород, а также чувствительность к бактериостатическому действию красителей (основного фуксина и тионина). Антигенная структура сложная и близкая для разных видов бруцелл. Два главных поверхностных антигена А и М имеют количественные видовые различия, их соотношение для B. melitensis составляет 1:20, для B. abortus, B. suis – 2:1.

Возбудитель бруцеллеза обладает общей для неспорообразующих бактерий устойчивостью к воздействию факторов окружающей среды, способен длительное время сохраняться в различных субстратах. Так, в молоке по данным разных авторов, бруцеллы способны сохраняться от 45 до 327 сут.; в масле, сливках, в домашнем сыре – до 3 недель, в сливочном масле – более 4 недель, в простокваше, сметане – 8-15 сут., в брынзе – до 60 сут., в кумысе, шубате (сброженное верблюжье молоко) – до 3 сут.; в мясе – до 12 сут., а в замороженном виде – до 5 мес.; во внутренних органах, костях, мышцах и лимфатических узлах инфицированных туш – в течение 1 мес. и более, в овечьей шерсти и смушках – от 1,5 до 4 мес. В естественных условиях во влажной почве и в навозе бруцеллы могут переживать свыше 2 мес.

Бруцеллы чувствительны к ультрафиолетовому излучению, действию прямых солнечных лучей и высоких температур: при температуре 100 °С погибают мгновенно, при 80-85 °С – через 5 мин., при 60 °С – через 30 мин. Сухой жар (90-95 ^оС) убивает бруцелл в течение часа. В то же время они довольно устойчивы к воздействию низких температур – сохраняют жизнеспособность при температуре минус 5-8 °С в течение 35 сут., а при минус 20^оС – в течение 20 сут.

Выраженной бактерицидной активностью по отношению к бруцеллам в течение 1-5 мин обладают растворы сулемы (0,1 %); креолина (0,5 %); фенола (3-5 %); хлорамина (0,01-0,05 %); серной, соляной и азотной кислот (0,5 %); уксусной кислоты и формалина (0,2 %). Однако бруцеллы остаются невосприимчивыми к действию 5 % раствора борной кислоты в течение 60 мин; 1-2,5 % растворов карболовой кислоты в течение суток, свежегашеной извести в течение 2 ч.

Наибольшую антибактериальную активность по отношению к бруцеллам проявляют препараты тетрациклинового ряда, особенно доксициклин; рифампицин, хлорамфеникол; фторированные хинолоны – флероксацин, пефлоксацин, офлоксацин, ципрофлоксацин, ломефлоксацин, а также гентамицин, сизомицин, мономицин и другие аминогликозиды; беталактамный карбапенемный антибиотик меропенем; макролид азалидного ряда – азитромицин.