Инструкция по применению «вич-1,2 аг/ат комботест»
|
Скачать 155.18 Kb.
|
  ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ«ВИЧ-1,2 АГ/АТ КОМБОТЕСТ» набора реагентов для одновременного выявления антител к ВИЧ 1 типа, ВИЧ 1 типа группы О, ВИЧ 2 типа и антигена р24 ВИЧ в сыворотке или плазме крови человека методом иммуноферментного анализа. Назначение Набор реагентов «ВИЧ -1,2 АГ/АТ КОМБОТЕСТ», далее по тексту – Набор, предназначен для одновременного выявления антител к ВИЧ 1 типа, ВИЧ 1 типа группы О, ВИЧ 2 типа и антигена р24 ВИЧ в сыворотке или плазме крови человека методом иммуноферментного анализа. Принцип методаДля проведения анализа используется полистироловый 96-луночный планшет, на поверхности лунок которого сорбированы синтетический пептид, представляющий собой иммунореактивную детерминанту субтипов ВИЧ-1 группы 0, рекомбинантный протеин, представляющий собой иммунореактивные детерминанты белков оболочки вирусов ВИЧ-1 и ВИЧ-2, а также pol белка ВИЧ, и моноклональные антитела к белку р24. Конъюгат представляет собой смесь антигенов ВИЧ, упомянутых выше, и моноклональных антител к белку р24, конъюгированных с пероксидазой хрена. Тестируемый образец сыворотки крови инкубируется в лунке планшета-иммуносорбента, антиген р24 и/или антитела к ВИЧ-1,2 присутствующие в образце, связываются с соответствующими антителами или антигенами ВИЧ, которыми покрыта поверхность лунки. Затем, после стадии промывания лунок, вносится конъюгат, который связывается с соответствующими антителами и/или антигеном р24 ВИЧ-1, уже связавшимися с соответствующими агентами на поверхности лунки. Не связавшиеся реагенты затем удаляют повторным промыванием, и в лунку вносится рабочий раствор хромогена, содержащий 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ) и перекись водорода. Цвет раствора в лунках, содержащих связавшийся конъюгат, в ходе инкубации становится голубовато-зеленым, после добавления стоп-реагента превращается в желтый. По завершении реакции оптическая плотность раствора (ОП) определяется на спектрофотометре при длине волны 450 нм/620 нм. Состав набора
Меры предосторожности при работе с набором• Не следует модифицировать и изменять процедуру проведения анализа. Не заменять реагенты, входящие в состав тест-набора данной серии, на реагенты наборов реагентов от других изготовителей, а также на реагенты других серий набора реагентов «ВИЧ 1,2 АГ/АТ КОМБОТЕСТ». Не уменьшать время инкубации, рекомендуемое данной инструкцией. • Перед началом проведения анализа выдержать набор реагентов при температуре от 18 до 30 ˚С в течение 30 минут. Сразу после использования остатки реагентов следует поместить в места их хранения (температура хранения от 2 до 8˚С). • Лабораторная стеклянная посуда, предназначенная для приготовления рабочих растворов реагентов, должна быть предварительно тщательно вымыта с использованием 1,0 М соляной кислоты и затем промыта очищенной водой. Следует отдавать предпочтение одноразовой пластиковой посуде. • Во время хранения или проведения анализа не подвергать реагенты воздействию прямого солнечного света. • Во время проведения анализа не допускать подсыхания стенок лунок. • Предусмотреть меры по предотвращению перекрестной контаминации реагентов. Важно, например, использовать одну маркированную пипетку только для работы с рабочим раствором хромогена, а другую - только для работы с конъюгатом. • Избегать забрызгивания краев лунок раствором конъюгата. Избегайте дотрагиваться до краев лунок кончиком пипетки с конъюгатом. Не выдувайте воздух из кончика пипетки одновременно с внесением очередного реагента в лунку. Для наиболее полного удаления реагента из кончика пипетки используется метод пипетирования. • Перед измерением оптической плотности жидкости в лунках убедиться, что внешние поверхности лунок планшета чистые и сухие, а на внутренних поверхностях лунок нет пузырей воздуха. • Избегать контаминации лунок тальком от одноразовых перчаток. • Не использовать СО2 инкубаторы для инкубации планшетов во время проведения анализа. • Температура инкубации должна быть от 36 до 38 ˚С. Оборудование и материалы, необходимые для проведения анализа 1. Вода очищенная; 2. рН-метр; 3. Спектрофотометр; 4. Вошер; 5. Термостат; 6. Ламинарный шкаф; 7. Таймер; 8. Холодильник; 9. Дозаторы одноканальные или с фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 1-200 мкл, 100-1000 мкл, 1000- 5000 мкл; 10. Мерные цилиндры на 10 мл, 25 мл, 50 мл, 100 мл, 500 мл; 11. Вакуумный аспиратор, содержащий 5% гипохлорид натрия; 12. Перчатки резиновые. Приготовление рабочих растворов реагентов
Аккуратно встряхнуть флакон с конъюгатом, чтобы удалить частички лиофильно высушенной субстанции с резиновой пробки. Открыть флакон и влить содержимое одного флакона раствора для разведения конъюгата во флакон с конъюгатом. Плотно закрыть флакон со смесью резиновой пробкой и тщательно перемешать, вращая и переворачивая флакон. Лиофильно высушенная субстанция должна раствориться в течение 30 мин. Время от времени необходимо перемешивать содержимое флакона. Рабочий раствор конъюгата имеет красный цвет. Рабочий раствор конъюгата хранить при температуре от 2 до 8 ˚С в течение 4 недель.
В чистый стеклянный флакон либо в новый полистироловый одноразовый флакон, к объему концентрата хромогена оранжевого цвета добавить равный объем бесцветного раствора для разведения хромогена. Полученный раствор имеет светло-желтый цвет. Важно, чтобы процедура приготовления проводилась в указанном порядке и чтобы все используемые пипетки и лабораторное стекло были чистыми. Рабочий раствор хромогена может быть приготовлен следующим образом: путем простого добавления содержимого одного флакона раствора для разведения хромогена во флакон, содержащий концентрат хромогена. Содержимого одного флакона, приготовленного таким образом рабочего раствора хромогена достаточно, как минимум, для 5 планшетов (см. Таблицу). Рабочий раствор хромогена готовится непосредственно перед добавлением в лунки планшета и не хранится. Таблица
Развести 20-кратный концентрат раствора для промывки в 20 раз очищенной водой для получения требуемого конечного объема. Или развести объем содержимого одного флакона концентрата раствора буфера для промывки очищенной водой до конечного объема 2500 мл. Рабочий раствор буфера для промывки следует хранить при температуре от 15 до 30 ˚С в плотно закрытом сосуде в течение 1 мес. Анализируемые образцы Для анализа необходимо использовать неразведенную сыворотку или плазму крови человека. Для получения сывороток из вены берут кровь в пробирку для центрифугирования и выдерживают при температуре от 18 до 30 ˚С не менее 3 ч, либо при температуре от 36 до 38 ˚С – 1 ч. Далее центрифугируют 30 мин при 1200 об/мин. Для получения плазмы крови используют консервант ЭДТА или цитрат натрия. Образцы исследуемых сывороток могут выдерживать нагревание до 56 ˚С в течение 3 ч. Образцы, отобранные для анализа, должны храниться при температуре от 2 до 8 ˚С не более 72 ч. Образцы сывороток или плазмы, не использованные для анализа в течение 72 ч, заморозить и хранить при температуре от минус 15 до минус 25 ˚С. Необходимо избегать замораживания и оттаивания образцов более трех раз. Проведение анализа -Выдержать набор реагентов при температуре от 18 до 30 ˚С в течение 30 мин. -Рассчитать необходимое количество стрипов для анализа с учетом контролей (К-, К1+, К2+, КАГ+). -Внести по 25 мкл раствора для разведения образцов в каждую лунку. -Внести по 100 мкл исследуемых сывороток и контрольных образцов в лунки планшета (К-, К1+, К2+, КАГ+). Для каждого полного планшета используйте лунки первой колонки для внесения контрольных образцов. -Внести контроли в указанные лунки после того, как все образцы уже внесены, а именно: внести по 100 мкл отрицательного контрольного образца (К-) в лунки А1, В1 и С1; по 100 мкл положительных контрольных образцов (К1+, К2+, КАГ+) в лунки D1, Е1, F1 соответственно. -Использовать поверхность белого цвета для визуализации факта внесения всех образцов в лунки. -Закрыть планшет крышкой и поместить его в термостат на 60 мин при температуре от 36 до 38 ˚С. -По окончании инкубации промыть лунки планшета рабочим промывочным раствором 5 раз, при этом убедитесь, что:
-Сразу после отмывки лунок планшета внести в каждую из них по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. -Закрыть планшет крышкой и поместить его в термостат на 30 мин при температуре от 36 до 38 ˚С. -По окончании инкубации пятикратно отмыть лунки планшета тем же раствором и по той же схеме как указано выше. -Сразу после отмывки лунок планшета внести в каждую из них по 100 мкл рабочего раствора хромогена. -Закрыть планшет крышкой и поместить его в термостат на 30 мин при температуре от 36 до 38 ˚С. -Избегать попадания прямого солнечного света на планшет. В лунках, содержащих положительные образцы, развивается голубовато-зеленое окрашивание. -Внести в каждую из лунок по 50 мкл стоп-реагента. -Сразу, но не позднее 15 мин, измерить на спектрофотометре оптическую плотность раствора в лунках планшета при длине волны 450 нм и референс-фильтре с длиной волны от 620 до 690 нм. Предварительно бланкировать фотометр по воздуху. Регистрация и интерпретация результатовРегистрация результатов -Результаты, полученные на каждом планшете, должны учитываться отдельно, независимо от того, сколько планшетов взято в постановку анализов. -Вычислить среднее значение оптической плотности отрицательного контроля (К-). Пример: Лунка А1 0.084 о.е. Лунка В1 0.086 о.е. Лунка С1 0.070 о.е. Среднее значение 0.240/3 = 0.080 о.е. -Вычислить критический уровень ОПкрит путем добавления 0,150 к среднему значению оптической плотности отрицательного контроля: (ОПК- + 0,15). Среднее значение ОП отрицательного контроля - 0.080 о.е. Критический уровень (ОПкрит) = 0.080+0.150=0.230 о.е. -Рекомендуется классифицировать образцы со значением ОП 450/620 > ОП (К-) + 0.07 о.е., но < ОП (К-) + 0.15 о.е., как погранично положительные (серая зона). Погранично положительные образцы должны быть перетестированы в повторах. Если погранично реактивный результат повторяется, или если получены противоречивые результаты, необходимо тестировать образцы с использованием тест-системы другого производителя или в подтверждающем тесте:
Если значение ОП450/620 образца < ОП(К-) + 0.07 о.е., образец считается нереактивным (отрицательным). -Результаты анализа можно учитывать, если соблюдены следующие критерии:
Постановка анализа, которая не удовлетворяет указанным условиям, должна быть повторена. Интерпретация результатов -Образцы, оптическая плотность которых оказалось меньше критического уровня в постановке, рассматриваются как отрицательные. -Образцы, оптическая плотность которых оказалась равной или выше значения критического уровня в постановке, рассматриваются как положительные. -Рекомендуется классифицировать образцы со значением ОП450/620 > ОП(К-) + 0.07 о.е., но < ОП(К-) + 0.15 о.е., как погранично положительные (серая зона). Аналитические характеристики набора 1. Чувствительность 1) При контроле на стандартной панели сывороток, содержащих антитела к ВИЧ 1 типа (ОСО 42-28-212-02П) все образцы должны иметь ОП > ОП(крит). Чувствительность – 100%. 2) При контроле на стандартной панели сывороток, содержащих антитела к ВИЧ 2 типа (ОСО 42-28-216-02) образцы должны иметь ОП > ОП(крит). Чувствительность – 100%. 3) При контроле на стандартной панели сывороток, содержащих антиген р24 ВИЧ 1 типа (ОСО 42-28-375-05) – значение ОП сыворотки, содержащей антиген в концентрации 25 пг/мл должно быть ≥ ОП(крит). Минимальная чувствительность набора реагентов при выявлении антигена р24 ВИЧ 1 должна быть 25 пг/мл. 2. Специфичность При контроле на стандартной панели, не содержащей антитела к ВИЧ (ОСО-42-28-214-02) ОП всех образцов должна быть < ОП(крит). Специфичность – 100%. Условия хранения и транспортирования набора Транспортирование наборов должно проводиться в соответствии с СП 3.3.2.1248-03, при температуре от 2 до 8 оС. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 оС в течение 3 суток. Замораживание не допускается. Хранение наборов в упаковке предприятия-изготовителя должно производиться в соответствии с СП 3.3.2.1248-03, при температуре от 2 до 8 оС в течение всего срока годности. Замораживание не допускается. Срок годности Срок годности - 12 мес. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит. Условия отпуска - для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений. Рекламации на качество Набора направлять в адрес предприятия – изготовителя: ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС» Россия , 125047, г. Москва, ул. 4-я Тверская-Ямская; д.2/11, стр.2, тел./факс (495) 741-49-89 и в адрес Национального органа контроля МИБП, ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора, Россия, 119002, г. Москва, пер.Сивцев Вражек, д. 41, (495) 241-39-22. =========================================================== К. 7-14-3.04 В. 020609  |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 |
Murex hiv ag/Ab Combination Комбинированная иммуноферментная тест-система для одновременного выявления антигена вич и выявления сероконверсии к вирусу иммунодефицита... |
|
Приказ 16 сентября 2003 г. N 442 об утверждении учетных форм для... В целях организации мониторинга за детьми, рожденными вич-инфицированными матерями, анализа и оценки ситуации по вич-инфекции среди... |
 |
Руководство по вич и спиду для инспекторов труда Программа вич и спид и сфера труда (мот/спид) Вич и спид – это проблема, связанная с правами на охрану здоровья и трудовыми правами, которая оказывает существенное влияние на... |
|
Руководство по вич и спиду для инспекторов труда Программа вич и спид и сфера труда (мот/спид) Вич и спид – это проблема, связанная с правами на охрану здоровья и трудовыми правами, которая оказывает существенное влияние на... |
|
Есть несколько путей передачи вич-инфекции Вич-положительной матери ребенку во время беременности, родов и при кормлении грудью |
|
Приказ от 15 июня 2012 г. N 795 о повышении эффективности мероприятий... Как следствие, растет число детей, рожденных вич-инфицированными матерями (2009 г. 411 ребенок, 2010 г. 484 ребенка, 2011 г. 552... |
|
О конкурсе журналистов "Жизнь есть, вич есть" в городе Екатеринбурге, 2014 год Конкурс журналистов " Жизнь есть, вич есть " (далее конкурс) проводится в целях привлечения средств массовой информации, осуществляющих... |
|
Клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза у больных... Болезнь, вызванная вирусом иммунодефицита человека [вич], появляющаяся в виде инфекционных и паразитарных болезней |
|
Пособие для специалистов, работающих в области профилактики вич/иппп и наркомании 2007 г Главный специалист Министерства здравоохранения Челябинской области по вич-инфекции |
|
Неблагополучная ситуация по вич-инфекции имеет необратимые последствия... Спидом или считает ее маловероятной, то есть относится к проблеме вич/спид недостаточно серьезно. Вместе с тем каждый второй подросток... |
|
Методические рекомендации мр 1 0076/1-13 Издание официальное Москва,... Методические рекомендации предназначены для специалистов, проводящих обследование населения на маркеры вич-инфекции, специалистов... |
|
Отчет о проведении научно-исследовательской работы на тему: разработка... Эпидемиология, лабораторная диагностика, классификация и клиника вич инфекции у детей |
|
Проект Цель изучения темы – формирование у студентов профессиональных умений выявлять факторы риска инфицирования и симптомы, характерные... |
|
Инструкция по применению F3| ergo содержание 1 объем поставки Прочитайте инструкцию по применению прибора перед его вводом в эксплуатацию и использованием. В любом случае соблюдайте указания... |
|
Инструкция по применению инструкция по применению Тест-полоски к системе контроля уровня глюкозы в крови, вариант инсполнения unistrip 1 |
|
О проведении оформления информационных уголков и стендов по профилактике вич/спид и других (роо) Шатойского муниципального района по профилактике заболеваний и предупреждению распространения инфекции, вызываемых вирусом иммунодефицита... |