Руководств о к практическим занятиям по биохимии

Скачать 2.6 Mb.

Название	Руководств о к практическим занятиям по биохимии
страница	14/31
Тип	Учебное пособие

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Учебное пособие

1 ... 10 11 12 13 14 15 16 17 ... 31

3.2. Спектрофотометрическое определение НАДН(Н⁺) и расчёт чистоты коммерческого препарата

Пиридиннуклеотиды (НАД⁺, НАДФ⁺), входящие в качестве коферментов в состав более чем 150 так называемых «пиридинзависимых» дегидрогеназ, играют существенную роль в реакциях окисления-восстановления. Спектрофотометрическое определение образующихся восстановленных форм пиридиннуклеотидов позволяет следить за ходом ферментативной реакции, так как реакция протекает по схеме:
Субстрат + НАД⁺  Продукт реакции + НАДН + Н⁺ (закисление среды)
Цель работы

Определить чистоту коммерческого препарата НАДН(Н⁺) восстановленного, учитывая, что при хранении восстановленная форма частично превращается в окисленную.
Принцип метода

В основе метода лежит существенное отличие спектров оптического поглощения окисленной и восстановленной форм кофермента. Измеряя в ходе окислительно-восстановительной реакции оптическую плотность при 340 нм можно установить (зная коэффициент молярной экстинкции  и толщину кюветы) количество динуклеотида в пробе, а соответственно и количество прореагировавшего субстрата.
Спектры поглощения окисленной (сплошная линия) и восстановленной (пунктирная линия) форм никотинадениндинуклеотида в концентрации 10^-4 М, рН 7,6

В расчетах исходят из величины коэффициента молярной экстинкции НАДН(Н⁺) при 340 нм в кювете толщиной 1 см ₃₄₀ = 6220 М^-1.см^-1, измеряемой на специальных приборах – спектрофотометрах. ФЭК, к сожалению, не позволяет полностью воссоздать условия, необходимые для определения НАДН(Н⁺) описанным методом, так как не обеспечивает измерения при этой длине волны. Кроме того, студенческий практикум не оснащен кварцевыми кюветами, а стеклянные кюветы имеют значительное оптическое поглощение в ультрафиолетовой области спектра. Поэтому измерения проводят в более длинноволновой области при λ=366 нм, используя другую величину коэффициента молярной экстинкции НАДН(Н⁺)

(₃₆₆ = 3300 М^-1.см^-1).
Выполение работы

Навеску динатриевой соли НАДН(Н⁺) (М = 710 г^.моль^-1) 35,5 мг растворяют в 5 мл Н₂О. Исходный раствор разводят в 50 раз (0,06 мл раствора довести в мерной пробирке дистиллированной водой до 3 мл), рассчитывают молярную концентрацию (с) полученного раствора НАДН(Н⁺) и измеряют оптическую плотность (D) при =366 нм против дистиллированной воды в кюветах с длиной оптического пути l = 0,5 см.

Необходимо рассчитать чистоту препарата (т.е. содержание НАДН(Н⁺) в растворе), учитывая, что концентрация чистого вещества в растворе прямо пропорциональна оптической плотности этого раствора, и зная, что ₃₆₆ = 3300 М^-1.см^-1.
Расчеты

Оптическая плотность полученного раствора НАДН(Н⁺) равна D_практ.. Теоретически оптическая плотность данного раствора должна быть равной D_теор =  ^. с ^. l. Зная коэффициент молярной экстинкции () и, зная молярную концентрацию разведенного раствора, находим D_теор. Тогда чистота препарата Х, пропорциональная отношению величин оптической плотности, равна:
X =

Выводы

Тестовые задания по теме по теме: «Липиды»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

Липиды - гидрофильные соединения.
Пальмитиновая и олеиновая жирные кислоты содержат одинаковое число атомов углерода.
Холестериды - это сложные эфиры холестерина и высших жирных кислот.
В состав цереброзидов входит гексоза.
Кардиолипин относится к глицеролипидам.
Липиды в комплексе с белками выполняют транспортную функцию в организме.
Содержит ли арахидоновая кислота четыре двойные связи?
Является ли линоленовая кислота незаменимой для человека?
Содержат ли фосфатидилхолины атом азота?
Могут ли липиды выполнять каталитические функции?
Являются ли глицерофосфолипиды основными компонентами клеточных мембран?
Регулируют ли сфингенины и церамиды рост и дифференцировку клеток?

2) Выбрать один правильный ответ

К глицерофосфолипидам не относятся:

лецитины
плазмалогены
кардиолипины
ганглиозиды
все вышеперечисленные соединения

Незаменимая жирная кислота:

олеопальмитиновая
стеариновая
олеиновая
линолевая
пальмитиновая

3) Найти соответствие

Транспортные формы липидов	% содержание белка
хиломикроны ЛПОНП ЛПНП ЛПВП аполипопротеины	А. 100 Б. 45 В. 25 Г. 10 Д. 2

1 ... 10 11 12 13 14 15 16 17 ... 31

Похожие:

	Руководство к практическим занятиям по биохимии Р 82 Руководство к практическим занятиям по биохимии: Учебное пособие/ Под ред. И. П. Смирновой. М.: Оргсервис-2000, 2008. 101 с		Методические указания к практическим занятиям по дисциплине «Экономика организации» Экономика организации [Текст]: методические указания к практическим занятиям для студентов очной формы обучения по специальностям...
	Учебное пособие к практическим занятиям по курсу «Фармацевтическое товароведение» Учебное пособие предназначено для подготовки студентов к лабораторно-практическим занятиям и включает название темы, цель занятия,...		Литература для студентов медицинских вузов (авторы) сборник тестов по биохимии В сборнике представлены тесты по биохимии, составленные в полном соответствии с теоретическим материалом по курсу «Биохимии», рекомендованному...
	Методические указания к практическим занятиям по общей, неорганической... Методические указания к практическим занятиям по общей, неорганической химии и органической предназначены для студентов специальности...		Методические рекомендации по практическим занятиям для студентов... Направляющие системы электросвязи: методические рекомендации по практическим занятиям для студентов специальностей 210400. 62, 210406....
	Материалы для подготовки к практическим занятиям по дисциплине «медицина катастроф» Для подготовки к занятиям студентов необходимо рекомендовать учебник Сахно или его электронную версию		Руководство к практическим занятиям учащихся химико-биологических... Белоусов Д. Л. Руководство к практическим занятиям учащихся химико-биологических классов по разделу «Общая генетика». Троицк, 2009....
	Руководство к практическим занятиям по психологии психических состояний... П 78 член-корр. Рао, д псх н., проф. В. И. Панов, д псх н., проф. А. Б. Леонова		Методические рекомендации к практическим занятиям по дисциплине «Программирование... Методические рекомендации к практическим занятиям по учебной дисциплине «Программирование для автоматизированного оборудования»
	Руководство к лабораторным и практическим занятиям по заводской технологии лекарств		Методические рекомендации к практическим занятиям по фармакологии для студентов
	«судебная медицина и психиатрия» Рекомендации по подготовке к семинарским (практическим) занятиям		Методические разработки к практическим занятиям по дерматовенерологии,... ...
	Методические материалы к практическим занятиям по дисциплине «современные... Методические материалы к практическим занятиям по дисциплине «современные методы социологического исследования» для магистрантов		Учебная программа дисциплины 3 Введение Рекомендации по подготовке к семинарским (практическим) занятиям

Руководство, инструкция по применению

Руководств о к практическим занятиям по биохимии

3.2. Спектрофотометрическое определение НАДН(Н+) и расчёт чистоты коммерческого препарата

Похожие:

3.2. Спектрофотометрическое определение НАДН(Н⁺) и расчёт чистоты коммерческого препарата