Материал и патологогистологические методы исследования
|
Скачать 398.14 Kb.
|
Патологогистологическая техника ВВЕДЕНИЕ В пособии изложены важнейшие гистологические и цитологические способы окраски срезов, а также основные гистохимические и электронно-микроскопические методы исследования, применение которых необходимо при выполнении студентами курсовых, дипломных и научно-исследовательских работ Тематический план изучения патологогистологической техники Материал и патологогистологические методы исследования. Взятие, фиксация и пересылка патологического материала, предназначенного для гистологического исследования. Подготовка патологического материала к микротомированию. Микротомы и приемы получения срезов на них. Методы окраски срезов и заключение окрашенных срезов под покровное стекло. Тема: МАТЕРИАЛ И ПАТОЛОГОГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Цель и содержание занятия – познакомить студентов с существующими методами изучения патологической анатомии. Следует подчеркнуть, что патологическая анатомия изучает нарушения нормального строения органов и тканей в больном организме. Изучению подвергаются как доступные невооруженному глазу изменения, так и более тонкие, гистологические, требующие применения микроскопа. Кроме морфологии повреждений, эта дисциплина изучает также вопросы морфогенеза (динамику морфологических изменений), этиологии, патогенеза (механизм развития), осложнения и исходы патологических процессов и болезней. Патологическая анатомия основной свой фактический материал о структурных нарушениях в больном организме получает при исследовании: - трупов животных, погибших от различных болезней; - выбракованных по разным причинам туш и внутренних органов убитых животных на мясоперерабатывающих предприятиях; - кусочков тканей и органов, взятых прижизненно (биопсия) у больных животных. В частности, с диагностической и научной целью при помощи игл-троакаров берут для микроскопического исследования кусочки печени, костного мозга, доступных лимфатических узлов и опухолей. Исследования патологического материала от вынужденно убитых животных, в разные сроки их заболевания, а также от убитых подопытных животных, на которых была искусственно воспроизведена болезнь, позволяют выяснить вопросы морфогенеза и патогенеза болезней. Основной принцип этого метода состоит в том, что после наружного осмотра трупа вскрывают брюшную и грудную полости и полость сердечной сумки. Обращают внимание на состояние серозного покрова, расположение внутренних органов и на наличие постороннего содержимого (трупный выпот, транссудат, экссудат и т. п.), после чего в определенной последовательности извлекают органы и изучают их макроскопически, т.е. невооруженным глазом. При этом устанавливают величину, вес, форму, цвет, консистенцию органа и т. п. Затем из органов и тканей вырезают небольшие кусочки в виде пластинок для микроскопического исследования. Послеубойное исследование туш и органов в местах переработки животных направлено на выпуск санитарно благополучной мясной продукции. Мясо и мясопродукты, полученные от больных животных, могут являться источником заражения человека инфекционными и инвазионными болезнями. Появление и распространение тех или иных инфекций или инвазий среди людей во многом зависит от качества ветеринарно-санитарного контроля за мясной продукцией. Кроме того, нередко при послеубойном исследовании туш и органов животных обнаруживают те или иные инфекционные и инвазионные заболевания, которые в хозяйствах не всегда распознают по клиническим признакам. Сигнализация о таких заболеваниях на места, откуда поступили больные животные, дает возможность своевременно организовать там соответствующие меры борьбы с заболеваниями. Послеубойная ветеринарно-санитарная экспертиза на мясоперерабатывающих предприятиях осуществляется в основном макроскопическим исследованием туш и органов. С учетом технологических процессов разработаны специальные приемы исследования убитых животных. Во всех сомнительных случаях при диагностике тех или иных патологических процессов и болезней, а также решении вопроса о степени санитарного благополучия мяса применяют лабораторные методы исследования (бактериологические, гистологические, химические и др.) в лабораториях ОПВК мясокомбината. Одновременно с этим проводится взятие патологического материала для гистологического исследования. Задачей патологогистологической техники является подготовка взятого материала для микроскопического исследования. Эта подготовка складывается из совокупности последовательных манипуляций, позволяющих изучить структуру клеток, тканей и органов животных организмов. С помощью методов гистологической техники из патологического материала изготовляют гистологические препараты, изучаемые в световом, фазовоконтрастном и люминесцентном микроскопе. Существуют особые методы обработки материала для электронного микроскопа. Основные требования к гистологическому препарату, изучаемому в световом микроскопе: получение прозрачности объекта и контрастности его структуры. Тема: ВЗЯТИЕ, ФИКСАЦИЯ И ПЕРЕСЫЛКА ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Цель и содержание занятия – знакомство студентов с правилами взятия материала, фиксацией его и пересылкой в ветеринарную диагностическую лабораторию. Правила взятия материала для патологогистологического исследования 1. Материал следует брать от свежих трупов не позднее 12 ч после смерти (убоя) животного, т. е. до наступления процессов автолиза и гниения. 2. Материал должен быть взят: от каждого органа, где обнаружены макроскопические видимые изменения, а также от главнейших внутренних органов. 3. От каждого патологически измененного органа нужно брать несколько кусочков из различных мест поражения. 4. В вырезанном для исследования кусочке, кроме измененного участка, должна быть нормальная ткань (рис. 1). 5. Вырезанные кусочки должны представлять собой пластинки толщиной не более 0,5-1 см. 6. Материал должен фиксироваться немедленно и непосредственно после взятия. Примечания. 1. Выбор направления разрезов зависит от особенностей микроскопического строения пораженного органа или ткани, а также от характера поражения 2. Следует избегать размозжения кусочков ткани, для этого необходимо пользоваться острыми инструментами (бритвы, секционные ножи). Ножницами лучше пользоваться при взятии материала из тонкостенных полых органов (кишечник, желчный пузырь и др.). Кусочки кости лучше выпиливать лобзиком. 3. Следует избегать обмывания и очистки поверхностей органов, из которых иссекается кусочек. 4. Учет взятого материала для исследования ведут в журнале, где кратко описывают, от какого животного и органа взят материал. Фиксация материала Первым и обязательным условием в патологогистологической технике является предупреждение и задержка развития посмертных изменений (автолиза и гниения) в тканях и органах. Таким образом, фиксация – это закрепление тканевых структур в том виде, в котором они были в момент взятия патологического материала. Взятые кусочки фиксируют путем обработки их в фиксирующих жидкостях. Сущность фиксации окончательно не выяснена. Известно лишь, что при этом происходит коллоидная реакция превращения тканевых белков из золя в гель, т. е. коагуляция (свертывание) их без грубых нарушений структуры клеток. Фиксирующие жидкости по-разному оказывают влияние на различные нормальные и патологические компоненты ткани и органов. Поэтому в каждом конкретном случае выбирают фиксаторы в зависимости от целей и задач исследования. Профиксированный материал можно сохранять длительное время. Недостатком метода фиксации является некоторое искажение структуры органа (уплотнение, сморщивание и др.). Искажение истинной структуры органа называется артефактом, который корректируется наблюдением свежих объектов, использованием различных фиксаторов. Фиксирующие жидкости разделяют на простые и сложные. Простые фиксирующие жидкости состоят из одного химического вещества (формалин, спирт, ацетон). В состав сложных фиксирующих жидкостей входит несколько веществ, и называется она по имени автора, например, жидкость Мюллера, Орта, Карнуа и др. Общие правила фиксации материала 1. Материал фиксируется непосредственно и немедленно после взятия. 2. Для фиксации материала следует употреблять стеклянную, керамическую или полиэтиленовую посуду (избегать металлической). В цехах мясо- и птицекомбинатов недопустимо пользоваться стеклянной и керамической посудой. 3. Объем фиксирующей жидкости должен в 5-10 раз превышать объем фиксируемого материала. 4. Для лучшего и равномерного проникновения фиксатора по всей толще кусочка его погружают в сосуд с фиксирующей жидкостью, на дно которого необходимо положить вату. 5. Фиксирующая жидкость меняется каждые сутки до тех пор, пока не станет прозрачной. 6. Материал снабжается этикеткой из плотной бумаги (фотобумага, ватман). Краткие сведения о патологическом материале на этикетке пишут графитным карандашом или тушью (рис. 2). 7. Фиксирование производится без доступа света. 8. Повышенная температура ускоряет фиксацию. Оптимальная температура фиксации + 37°С. Для некоторых фиксаторов необходима более низкая температура (до 0°С).  Рис. 1. Схема вырезания кусочков из пораженного участка органа  Рис. 2. Фиксация тканей легкого и кишечника Самым распространенным, доступным и эффективным фиксатором является формалин, который представляет собой 40%-ный водный раствор газа формальдегида (альдегид муравьиной кислоты, НСНО). Правила фиксации материала в формалине 1. Формалин хранится в темном помещении или в темной посуде при температуре не ниже +9°С. 2. Продажный формалин нейтрализуют прибавлением сухого мела или углекислой магнезии до 1/10-1/20 его объема. 3. Рабочей фиксирующей жидкостью является 10-20%-ный водный раствор формалина: нейтрального формалина – 10-20 см3, воды водопроводной – 90-80 см3. Разводить формалин дистиллированной водой не рекомендуют, так как она имеет слабокислую реакцию, вследствие чего вызывает набухание тканей. 4. Показателем окончания фиксации в формалине является исчезновение кровавой окраски в глубоких частях фиксируемого объекта (приблизительно 24-48 ч). 5. Иногда применяют метод экстренной фиксации: - кусочек материала толщиной менее 0,5 см помещают в пробирку с 20%-ным водным раствором формалина; - нагревают на пламени газовой горелки или спиртовки в течение 3-5 мин до появления пузырьков (не кипятить!). Достоинства фиксации материала в формалине 1. Простота метода. 2. Достигается хорошая сохранность гистоструктур, а также возможность сохранения объектов довольно долгое время. Недостатки метода 1. Невозможность выявления веществ, растворимых в воде (гликоген, мочевая кислота и др.). 2. Не удается четко обнаружить тонкие цитологические структуры. Для выявления веществ, растворимых в воде, применяют безводные фиксаторы (спирт, ацетон). Этиловый спирт употребляют как абсолютный, так и 96°. Время фиксации продолжается 2-24 ч в зависимости от толщины исследуемого объекта. При этом удается сохранить такие вещества, как муцины, гликоген, мочевую кислоту, железо, кальций. Вместе с тем, спирт вызывает некоторое сморщивание клеток в результате быстрого отнятия воды, растворяет жиры и гемоглобин. Метиловый спирт (метанол) применяют для цитологических исследований в качестве фиксатора мазков крови и отпечатков с органов и тканей. Метанол – сильный яд, хранится по правилам ядовитых веществ группы А. Ацетон применяется при необходимости быстрого фиксирования ткани. Толщина фиксируемых объектов 3-4 мм, время фиксации 2-3 ч. Для выявления тонких цитологических структур употребляются сложные фиксирующие жидкости. I. Жидкость Мюллера 1. Рецепт. Двухромовокислого калия – 2,5. Сернокислого натра – 1,0. Дистиллированной воды – 100,0. 2. Продолжительность фиксации 1-6 недель (при I = 37°С, 1-2 недели – с ежедневной сменой жидкости). II. Жидкость Орта 1. Рецепт. Жидкости Мюллера – 90,0. Формалина продажного – 10,0. 2. Продолжительность фиксации 1-2 суток. III. Жидкость Карнуа 1. Рецепт. Спирта абсолютного – 60,0 Хлороформа – 30,0 Уксусной ледяной кислоты – 10,0 (ex tempore) 2. Продолжительность фиксации 2-4 ч, после чего кусочки переносят в чистый спирт (96° или абсолютный). IV. Жидкость Буэна 1. Рецепт. Насыщенного водного раствора пикриновой кислоты – 75,0. Формалина (неразведенного) – 25,0. Ледяной уксусной кислоты – 5,0. 2. Жидкость готовится перед употреблением. Продолжительность фиксации от 1-24 ч в зависимости от толщины объекта. Правила пересылки патологического материала В случаях возникновения необходимости подтверждения причины гибели животного необходимо соответствующий патологический материал направить в диагностическую ветеринарную лабораторию для исследования. 1. В лабораторию посылается заранее профиксированный материал (реже консервированный). При пересылке материала необходимо предусмотреть, чтобы материал был помещен в посуду с притертой пробкой (герметическая упаковка). Пробка должна быть закреплена проволочкой или бечевкой и залита менделеевской замазкой, сургучом, смолой, парафином или воском. Посуду обкладывают ватой, паклей, стружками и вкладывают в ящик. Кости обертывают целлофаном, полиэтиленовой пленкой или смоченными в дезрастворе марлей или полотном и также упаковывают в ящик. 2. В холодное время года для пересылки используют 30-50%-ный раствор глицерина, приготовленный на 10%-ном формалине, 70%-ный спирт или насыщенный раствор поваренной соли. 3. Трупы мелких животных, части трупов крупных животных и отдельные органы в свежем (не фиксированном) виде посылают в диагностическую ветеринарную лабораторию только с нарочным. 4. Пересылаемый материал от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик. Перед упаковкой материал необходимо завернуть в холст или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором (креолина, лизола, известкового молока), и уложить в ящик со стружками, мякиной или опилками. На каждый отправленный в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ. Это письмо посылают одновременно с материалом, почтой или нарочным. При необходимости к письму прилагают дополнительные сведения, в частности, какая помощь оказана животному, какие лекарственные средства применялись, с какого времени скармливался корм животным и т. д. Обязательно указывают эпизоотологические данные. Следует исключать случаи посылки идентичного материала в разные лаборатории для исследования. Так как морфологические изменения при болезни могут находиться только в одной части объекта, а в другой они отсутствуют, отсюда и результаты исследований будут разными. Форма сопроводительного документа К патологическому материалу В ________________________________________ ветеринарную лабораторию Адрес _____________________________________________________________ __________________________________________________________________ При этом направляется для ___________________________________________ патологический материал (перечислить какой) __________________________ __________________________________________________________________ Oт __________________ , принадлежащей ______________________________ вид и возраст животного __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ адрес предприятия, хозяйства и т.д. Дата заболевания животного _____________ Дата падежа _________________ Клиническая картина _______________________________________________ __________________________________________________________________ Данные патологического вскрытия (подробный протокол) ________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ Предположительный диагноз _________________________________________ Цель исследования _________________________________________________ Дата отправки материала ____________________________________________ Подписи __________________________________________________________ |
Похожие:
 |
Методическое пособие для самостоятельной подготовки студентов Тема:... Изучение темы: «Методы исследования в гинекологии» способствует формированию следующих компетенций в соответствии с видами Вашей... |
|
Методические рекомендации по изучению дисциплины «Методы исследований... Целью освоения дисциплины «Методы исследования в социальной работе» является формирование целостной системы знаний об основных общенаучных... |
 |
В. И. Добреньков, А. И. Кравченко методы социологического исследования учебник Д 55 Методы социологического исследования: Учебник. — М.: Инфра-м, 2004. — 768 с. — (Классический университетский учебник) |
|
Тема современные методы системных исследований Основные направления социологических исследований. Методы, используемые в рамках социологических исследований. Методологическая стратегия... |
|
Методы сбоpа социологической инфоpмации Классификация методов социологического исследования В социологических исследованиях чаще всего пpименяются следующие методы сбоpа пеpвичной социологической инфоpмации |
|
Методические материалы к практическим занятиям по дисциплине «современные... Методические материалы к практическим занятиям по дисциплине «современные методы социологического исследования» для магистрантов |
|
Курсовая работа по теме «Графические методы исследования творческого мышления учащихся» |
|
Ресурсный центр «Магнитно-резонансные методы исследования» Оборудование и методики Научного Парка Санкт-Петербургского государственного университета |
|
Методы исследования в биологии (10 класс) Цель: создать условия для осмысления информации об основных методах биологических исследований |
|
Демографически-структурная теория и ее применение в изучении социально-экономической... Специальность 07. 00. 09 – историография, источниковедение и методы исторического исследования |
|
Интервьюирование Экспериментально-психологические (пато- и нейропсихологические)... Охватывает сильное беспокойство, когда я думаю о своих делах и заботах |
|
Теоретические аспекты психологической безопасности образовательной среды Организация и методы исследования базовых убеждений личности студентов вузов и профтехучилищ |
|
Темы рефератов для заочного отделения. Приборы дистанционного зондирования Геофизические методы исследования земной коры. В. К. Хмелевской. Издательство ун-та Дубна |
|
Урок географии в 7 классе по теме «Географическое положение Евразии» Методы: Икт технологии, раздаточный материал, атласы,карты, выполнение поисковой и практической работы по теме урока |
|
Программа дисциплины методология и методы социологического исследования... Авторский коллектив: Астахова Н. В. (), Градосельская Г. В. (mss981009@mail ru), Оберемко О. А. (), Пашкевич А. В. (), Петренко Е.... |
|
Цели освоения дисциплины: получение теоретических представлений о... Научить пользоваться статистической отчетностью, применять научные методы статистического исследования и за статистическими показателями... |