Постановление от 28 ноября 2013 года n 64 Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил сп 3118-13 "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)"

Методики контроля качества мертиолята натрия и формалина

Контроль качества мертиолята натрия

Мертиолят (тиомерсаль) - белый или кремоватый порошок, хорошо растворим в воде. При 20°С 1 часть порошка должна без остатка раствориться в 1 части дистиллированной воды, а также в 30 частях 95°-ного этилового спирта. Раствор бесцветный или светло-желтый. Мертиолят почти не растворим в бензоле и эфире. Свежеприготовленный 1%-ный раствор мертиолята должен иметь рН 6,0-8,0.
Для проверки препарата к 0,05 г порошка добавляют 5 мл дистиллированной воды. После добавления к раствору 1 мл 10%-ного раствора азотно-кислого серебра должен выпасть белый осадок. Если к аналогичному раствору мертиолата добавить 1 мл 10%-ного раствора сульфита меди, то должен появиться осадок зеленого цвета.
Для контроля на ртутные соли готовят раствор из 0,1 г порошка в 5 мл дистиллированной воды. После добавления к раствору мертиолята 1,0 мл свежеприготовленного раствора сульфида натрия выпадает белый осадок. Последний не должен менять цвета в течение 30 мин в темном месте.
Для количественного контроля 0,3 г препарата растворяют в 10 мл воды, добавляют 1,5 г растертого перманганата калия и хорошо перемешивают. Через 5 мин в колбу осторожно добавляют при постоянном перемешивании по каплям 5 мл концентрированной серной кислоты. Через 5-10 мин выделяющийся осадок растворяют при постепенном добавлении 4-8 мл 3%-ного раствора перекиси водорода. К обесцвеченному раствору прибавляют по каплям 5% раствор перманганата калия до не исчезающего розового окрашивания (разложение перекиси водорода). Раствор вновь обесцвечивают добавлением по каплям 4%-ного раствора щавелевой кислоты. Полученный раствор после добавления 5 мл 10%-ного раствора железоаммиачных квасцов медленно титруют 0,1 н раствором роданида аммония до изменения окраски; 1 мл 0,1 н раствора роданида аммония соответствует 0,01003 г ртути или 0,02024 г мертиолята.

Контроль качества формалина

Полноценный формалин должен содержать 37-40% формальдегида. Такой раствор формальдегида учитывают как цельный формалин. Обычно коммерческий препарат содержит значительно меньше формальдегида. Поэтому необходимо произвести соответствующий перерасчет при изготовлении его рабочих растворов. Определение концентрации формалина проводят ареометрически при 15°С. В цилиндр наливают формалин, доведенный до 15°С, и опускают ареометр, который определяет плотность формалина. Исходя из плотности, учитывают содержание формальдегида по следующей шкале:

1,002=1%;	1,004=5%;	1,028=10%;	1,043=15%;
1,056=20%;
1,071=25%;	1,085=30%;	1,090=32%;	1,096=34%;
1,102=36%;
1,106=38%;	1,111=40%

В последующем при изготовлении растворов формалина учитывают содержание формальдегида следующим образом. Например, необходимо приготовить 1%-ный раствор формалина, а имеющийся у нас формалин содержит только 25% формальдегида. В этом случае на 100 мл 0,85%-ного раствора хлористого натрия берут не 1 мл формалина, а 1,6 мл и т.д.
Наиболее целесообразно антибактериальную активность формалина определить следующим образом. В приготовленную взвесь органов нормального животного, например, белой мыши, внести взвесь, содержащую в 1 мл 1 млрд живых бактерий ЕВ, добавить формалин из расчета содержания 1% полноценного формалина, перемешать и оставить при комнатной температуре. Через 2-4 часа провести контрольный высев на пластинку с агаром и поставить при 28°С. При отсутствии роста на пластинке через двое суток инкубации формалин можно признать пригодным к применению.
Метод определения неспецифического действия формалина на антиген может быть осуществлен путем постановки РНАт с материалом, прогретым при 56°С в течение 30 мин.
Для установления неспецифического действия формалина необходимо добавить его в концентрации 1-2% к культуре ЕВ, выращенной при 37°С, с концентрацией 1 млрдм.к. в 1 мл, выдержать взвесь не менее 4 часов, затем развести до концентрации 1 млн м.к. в 1 мл и с этой взвесью поставить РПГА с чумным антительным диагностикумом.
Приложение 15

к СП 1.3.3118-13
     

     

Схемы принципиальных планировок комнат блока для работы с инфицированными животными

     

  



            

1 - биопробная
2 - вскрывочная
3 - полевая комната
4 - бактериологическая
5 - предбокс
6 - комната для снятия п/ч костюма
7 - комната для надевания п/ч костюма
8 - комната для загрузки материала в автоклав
9 - комната обеззараживания инвентаря для содержания б/п животных
10 - комната для разгрузки автоклава
11 - комната для разборки обеззараженного материала (моечная)
Ш - окно (дверь) для приема ^ - шлюз (передаточное окно) полевого материала V-"
|__j - проходной автоклав
Приложение 16

к СП 1.3.3118-13

     

     



     

     

Приложение 17

к СП 1.3.3118-13

     

     

Наименование организации

     

КОНТРОЛЬНЫЙ ЛИСТ

учёта инструктажей по биологической безопасности

1. Отдел (лаборатория, подразделение)
2. Фамилия, имя, отчество
3. Дата поступления в отдел (лабораторию)
4. Инструктаж по ББ (инструкция N _____) на рабочем месте провёл руководитель группы
(должность, подпись, дата, фамилия)
5. Инструктаж усвоил
(должность, подпись, дата)
6. Инструктаж по ББ принят, разрешаю допустить к самостоятельным работам в качестве
Начальник подразделения
		(подпись, дата, фамилия)
7. Инструктаж на рабочем месте проведён:

Дата	Должность инструкти- руемого	По какой инструкции проведён инструктаж (инв. N)	Роспись лица, проводившего инструктаж	Роспись лица, получившего инструктаж	Роспись заведующего отдела (лаборатории)
1	2	3	4	5	6

     

     

Приложение 18

к СП 1.3.3118-13
     

     

Обработка и обеззараживание материала при проведении серологических и геннодиагностических исследований

Обработка исследуемого материала, инфицированного (подозрительного на инфицирование) микроорганизмами I-II групп патогенности (бактериями, не образующими споры, хламидиями, риккетсиями и возбудителями глубоких микозов), проводится следующим способом:
- к исследуемому образцу добавляют мертиолят натрия до конечной концентрации 1:10000 (0,01%) и прогревают его при 56°С в течение 30 мин. Затем, 100 мкл образца переносят в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл, добавляют лизирующий раствор, приготовленный на основе 6 М гуанидинизотиоцианата, в объеме указанном в инструкции по применению к набору реагентов и инкубируют 15 мин при 65°С. После выполнения данных процедур материал считается обеззараженным.
Обработка исследуемого материала, инфицированного (подозрительного на инфицирование) бактериями, образующими споры (возбудитель сибирской язвы), проводится следующим способом:
- исследуемый материал в количестве 0,1 мл засевают в пробирки с 0,9 мл бульона Хоттингера, рН 7,2 и инкубируют с аэрацией при 37°С в течение 2,5 ч. Добавляют пенициллин до конечной концентрации 1000 ед/мл и инкубируют при 37°С в течение 15 мин. После инкубации с пенициллином, исследуемый материал прогревают на водяной бане в течение 10 мин. при температуре 100°С. Затем 100 мкл обработанного образца переносят в пробирки объёмом 1,5 мл и добавляют лизирующий раствор, приготовленный на основе 6 М гуанидинтиоизоцианата в объеме, указанном в инструкции по применению к набору реагентов, и инкубируют 15 мин при 65°С. После выполнения данных процедур материал считается обеззараженным.
Обработка исследуемого материала, инфицированного вирусом натуральной оспы, проводится следующим способом:
- материал (100 мкл) помещают в пробирку объемом 1,5 мл, добавляют 400 мкл лизирующего буферного раствора, содержащего 100 мМ Трис-НСI (рН=8), 100 мМ ЭДТА, 100 мМ NaCl, 1% SDS, и инкубируют 10 мин при температуре 65°С. Добавляют 50 мкл раствора протеиназы К (10 мг/мл), перемешивают и инкубируют в течение 1 часа при 56°С. Центрифугируют в течение 5 мин при 14000 об/мин для осаждения нерастворенных частиц. Супернатант переносят в стерильные пробирки объёмом 1,5 мл, добавляют равный объёма смеси фенол/хлороформ (рН 8,0) и тщательно перемешивают. Затем центрифугируют в течение 5 мин при 10000 g. Переносят верхнюю водную фазу, содержащую раствор фенола и ДНК, в новую пробирку, добавляют 1/10 по объёму 3 М ацетата натрия (рН 5.5), 30-40 мкг РНК-носителя (1 мкл раствора РНК-носителя с концентрацией 30-40 мкг/мкл) и равный объем изопропанола. Затем центрифугируют в течение 15 мин при 10000 g при 4°С. Полученный осадок промывают добавлением 1 мл 70% этанола и центрифугированием в течение 5 мин при 14000 об/мин при 40°С. После выполнения данных процедур материал считается обеззараженным.
Обработка исследуемого материала, инфицированного вирусами I-II групп патогенности (кроме вируса оспы), содержащего инфекционную (позитивную) РНК, проводится следующим способом:
- материал (100 мкл) помещают в пробирку объёмом 1,5 мл, добавляют 500 мкл лизирующего буфера на основе 6 М гуанидинизотиоцианата и фенола (1:1), и инкубируют 20 мин при температуре 65°С. Затем выделяют РНК, используя метод нуклеосорбции на силикагеле, начиная с этапа добавления сорбента, либо метод осаждения РНК этанолом в присутствии 0,3 М ацетата натрия. Обратную транскрипцию выполняют в соответствии с инструкцией по применению к набору реагентов. Затем в образцы с кДНК добавляют РНКазу А до конечной концентрации 25 мкг/мл. После выполнения данных процедур материал считается обеззараженным.
Обработка исследуемого материала, инфицированного (подозрительного на инфицирование) вирусами I-II групп патогенности, содержащих неинфекционную (негативную) РНК или ДНК проводится следующим образом:
- материал (100 мкл) помещают в пробирку объемом 1,5 мл, добавляют 500 мкл лизирующего буфера, на основе 6 М гуанидинизотиоцианата и фенола (1:1) и инкубируют 20 мин при температуре 65°С. После выполнения данных процедур материал считается обеззараженным.
Обработка исследуемого материала, подозрительного на инфицирование высокопатогенным неизвестным возбудителем, проводится в соответствии с обработкой материала, инфицированного бактериями образующими споры и (или) обработкой материала, инфицированного вирусом натуральной оспы.
Режим обеззараживания суспензий внутренних органов или костного мозга животных, материала от больных людей, субстратов гнезд птиц и млекопитающих, погадок хищных птиц, а также бактериальных взвесей определяется видом возбудителя. Обеззараживают возбудителей:
- чумы добавлением проверенного на бактерицидное действие формалина до 1-2%-ной конечной концентрации с последующей экспозицией не менее 12 ч или до 4%-ной концентрации с экспозицией при комнатной температуре в течение 1 ч;
- бруцеллеза и туляремии кипячением в течение 20 мин с последующим добавлением проверенного на бактерицидное действие формалина до 1-2% концентрации с последующим выдерживанием не менее 12 ч или до концентрации 4% с экспозицией при комнатной температуре в течение 1 ч;
- сапа и мелиоидоза добавлением формалина до 4%-ной концентрации с последующей экспозицией в течение 12 ч;
- холеры кипячением в течение 30 мин;
- сибирской язвы кипячением в течение 60 мин с последующим добавлением формалина до 4%-ной концентрации и экспозицией до 1 ч;
- глубоких микозов добавлением 10% раствора формалина с последующей экспозицией в течение 24 ч при комнатной температуре или в течение 2 ч при температуре (371)°С.
Приложение 19

к СП 1.3.3118-13
     

     

Список сокращений

ООН - особо опасные инфекции.
ПБА - патогенные биологические агенты (патогенные для человека микроорганизмы (бактерии, вирусы, хламидии, риккетсии, грибы), включая генно-инженерно-модифицированные, яды биологического происхождения (токсины), а также любые объекты и материалы, включая полевой, клинический, секционный, подозрительные на содержание перечисленных агентов).
ППР - планово-предупредительный ремонт.
СИЗ - средства индивидуальной защиты.
ИСИЗ - изолирующие средства индивидуальной защиты.
ФОВ - фильтры очистки воздуха.

Электронный текст документа

подготовлен ЗАО "Кодекс" и сверен по:

Бюллетень нормативных актов

федеральных органов

исполнительной власти,

N  31, 04.08.2014

(постановление, Санитарные правила);

официальный сайт Минюста России

www.minjust.ru (сканер-копия)

по состоянию на 28.05.2014

(приложения к Санитарным правилам)