Практикум по ветеринарной микробиологии

Скачать 3.35 Mb.

Название	Практикум по ветеринарной микробиологии
страница	9/27
Тип	Учебники и учебные пособия

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Учебники и учебные пособия

1 ... 5 6 7 8 9 10 11 12 ... 27

Тема 8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ

В результате проникновения патогенных микробов в восприимчивый организм животного возникает инфекционный процесс, который в зависимости от состояния макроорганизма и условий среды может иметь разное течение: острое, подострое и хроническое. Встречаются и стертые формы.

Специфической причиной инфекционного процесса служит возбудитель — микроб, но проявление болезни во многом зависит от состояния макроорганизма. Бывает и так, что при внедрении микроба в организм болезнь не развивается вследствие большой сопротивляемости макроорганизма. Окружающая среда может изменить эти соотношения, понизить резистентность (сопротивляемость) макроорганизма, обусловливая благоприятные условия для микроба. Куры, например, обычно не болеют сибирской язвой, так как температура тела у них доходит до 42 °С — условие, неблагоприятное для развития возбудителя. Если охладить организм курицы опусканием ее в воду (при наличии в организме сибиреязвенного микроба), то возникает болезнь.

Большинство болезней имеют свойственные им клинические признаки, определенное течение и сопровождаются характерными изменениями в органах и тканях. В результате взаимодействия возбудителя с организмом вырабатываются антитела. Это дало возможность разрешить многие вопросы серологической и аллергической диагностики инфекционных болезней.

Для того чтобы доказать специфичность возбудителя, его необходимо выделить из больного организма или трупа, воспроизвести подобную картину болезни после введения подопытному животному и затем из трупа выделить культуру микроба, идентичную введенной.

Одни микробы, проникая в организм, размножаясь в крови и органах, вызывают его гибель, другие подобное действие оказывают, выделяя на месте внедрения токсин.

Возбудителей сибирской язвы (В. anthracis), рожи свиней (Erysipelothrix insidiosa), бруцеллеза (Brucella) и других инфекционных болезней выделяют из органов и тканей трупа. Возбудителя же столбняка (С. tetani) можно обнаружить только на месте внедрения; размножаясь, он выделяет токсин, который по нервным путям проникает в центральную нервную систему и вызывает судорожные сокращения мышц. Все многообразие проявления инфекционного процесса требует глубокого и детального знания особенностей возбудителя и клинического течения болезни.

Взятие патологического материала для лабораторного исследования. Для установления диагноза и выяснения причины гибели животных в лабораторию направляют измененные органы, ткани. Материал должен быть свежим, взят по возможности стерильно в чистую, стеклянную или другую водонепроницаемую посуду. Необходимо помнить, что органы и ткани, предназначенные для микробиологического исследования, нельзя консервировать химическими веществами, губительно действующими на микробов. Из такого материала невозможно будет выделить возбудителя, а следовательно, установить причину смерти животного. Если нет возможности быстро доставить материал в лабораторию, то его помешают в банку с 30...40%-м стерильным водным раствором глицерина.

Для микроскопического исследования посылают мазки, приготовленные из органов, тканей, гноя и различных выделений животного. Для гистологического исследования материал консервируют в 10%-м растворе формалина или 96%-м спирте.

Правильный отбор материала и его транспортировка в значительной мере определяют успех исследований. При взятии материала ориентируются на клинические признаки болезни, которые указывают на поражение той или иной системы, патологоанато-мическую картину вскрытия (изменения в различных органах — печени, легких, кишечнике и др.), а также на предварительный диагноз, поскольку для каждой инфекции характерна определенная локализация возбудителя в организме.

Материал для исследования берут прижизненно или посмертно (от павших или убитых с диагностической целью животных), но во всех случаях желательно от животных, не подвергавшихся лечению антимикробными препаратами. Патологический материал отбирают в максимально короткие после гибели сроки, так как уже через 2..,3 ч после смерти нормальная микрофлора начинает проникать в органы и ткани, что затрудняет выделение возбудителя в виде чистой культуры.

Чтобы избежать контаминации посторонней микрофлорой, исследуемый материал берут стерильно, с использованием стерильного инструмента и посуды для транспортировки.

Трупы мелких животных направляют в лабораторию целиком.

Паренхиматозные органы и их фрагменты (у крупных животных) берут, соблюдая правила асептики. Каждый орган (фрагмент) помещают в стерильную посуду, транспортируют в нативном виде или консервируют одним из способов.

Трубчатые кости очищают от мышц, сухожилий, заворачивают в ткань, смоченную 5%-м раствором фенола, или пересыпают поваренной солью и затем заворачивают в ткань.

Гной, пунктаты органов, экссудат берут при помощи стерильного ватного тампона, шприца.

Кровь (15...20 мл) следует брать при лихорадочных состояниях стерильным шприцем. Кровь, а также другие жидкие материалы можно отбирать стерильной пастеровской пипеткой с последующим запаиванием ее кончика.

Перед взятием мочи наружные половые органы обмывают, ополаскивают стерильным физиологическим раствором, осушают стерильным марлевым тампоном. Первую порцию мочи не берут, последующую в необходимом объеме набирают в стерильную посуду.

Мокроту собирают до приема корма. Из трахеи ее берут при помощи стерильного трахеотубуса и стерильного ватного тампона на проволоке. При глубоком (до бифуркации) введении тампона возникает кашель и удается получить бронхиальную слизь. Тампон с материалом помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. При взятии материала из носоглотки используют специальные приборы, носоглоточные тампоны на изогнутой проволоке, носовые ватно-марлевые тампоны.

Для взятия секрета молочной железы сосок обмывают водой, обрабатывают этанолом, ополаскивают стерильным физиологическим раствором, сцеживают и удаляют первую порцию; для микробиологического исследования берут последующие порции молока.

С п и н н о-м озговую жидкость обычно берут путем пункции при наличии менингоэнцефалитического синдрома.

При исследовании кишечника и его содержимого пересылают отдельные отрезки (сегменты) кишечника, перевязанные на концах лигатурами. В некоторых случаях представляющие интерес отрезки кишечника освобождают от содержимого, промывают стерильной водой и помещают в банку со стерильным 30%-м водным раствором глицерина или насыщенным раствором хлорида натрия. Кишечник отправляют в лабораторию вместе с регионарными лимфатическими узлами.

Фекалии берут стерильными ватными или ватно-марле-выми ректальными тампонами, которые вводят на 8...10 см в прямую кишку, а затем помещают в стерильную пробирку. Если нет возможности сразу сделать посев, используют консервирующие смеси. В противном случае нарушается исходное количественное соотношение микробных видов и размножение некоторых бактерий может привести к инактивации искомого возбудителя.

Консервирование, Транспортировка и хранение материала. Материал помещают в стерильную стеклянную посуду (пробирки, флаконы, банки и др.), закупоривают. При подозрении на особо опасные инфекции сосуды помешают в герметичный металлический пенал (ящик), который опечатывают.

Транспортировку и хранение материала до исследования проводят таким образом, чтобы предотвратить размножение сопутствующей микрофлоры и инактивацию искомого возбудителя. С этой целью исследуемый материал (кусочки органов) помещают в стерильную смесь из равных объемов глицерина и физиологического раствора или помещают в термос, содержащий: 1) снег (лед) и поваренную соль (в соотношении 3 : 1), температура смеси —15...—20 °С; 2) равные части сухого льда и этанола, температура смеси около —70 "С.

Для консервирования материала, содержащего энтеробакте-рии, используют смеси, в которых исследуемый материал должен составлять 1/3 общего объема:

глицериновая смесь: глицерин — 500 мл, физиологический раствор—1000мл; рН доводят до 7,8...8,0 добавлением 20%-го раствора гидрофосфата калия. Стерилизация дробная, текучим паром.

Фосфатная буферная смесь: дистиллированная вода—1000мл, дигидрофосфат калия — 0,45 г, гидрофосфат калия — 5,34 г. Стерилизация 20 мин при 121 °С.

Для энтеробактерий используют также накопительные среды (селенитовая, магниевая, желчный бульон), которые должны составлять 4/5 общего объема. Независимо от способа консервирования фекалии транспортируют и сохраняют до посева при 2...6'С.

Упаковка и пересылка патологического материала.

Патологический материал доставляется нарочным. Органы или их части помешают в стеклянные банки, которые плотно закрывают и опечатывают. Трупы животных перевозят в плотных деревянных ящиках с опилками, которые впитывают выделяемую жидкость. Патологический материал при особо опасных инфекциях (сибирская язва, сап, туберкулез, бруцеллез, эм-^ар) кладут в стеклянную или плотную металлическую посуду, закрывают и опечатывают, а затем помещают в деревянный ящик.

Вместе с патологическим материалом направляют сопроводительную, в которой указывают: название хозяйства (адрес); сведения о признаках болезни, применяемых средствах лечения, кормлении животных и уходе за ними; данные об эпизоотической обстановке в прошлом и настоящее время; какие и когда проводились прививки, а также вид и возраст павшего животного; перечень материала, направляемого для исследования; основные патологические изменения в трупе; предполагаемая причина падежа; на какое заболевание необходимо провести исследование.

Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при 4°С в течение 1...2сут; консервированный в 50%-м растворе глицерина (кусочки органов) — несколько недель; для длительного хранения материал замораживают при —15...—20 С.

Кровь для серологических исследований у крупного рогатого скота, овец, лошадей берут из яремной вены в стерильные бактериологические пробирки в объеме 10... 15 мл, у свиней — из хвостовой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц — из подкрылковых вен, у кроликов — из краевой ушной вены. Пробирки с кровью выдерживают до формирования сгустка в тепле (1,5...2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обводят сгусток стеклянной чистой палочкой или спицей. Для отстаивания

сыворотки пробирки с кровью помещают в холодильник (4...6Х) на 18...20ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробирки с резиновыми пробками. При необходимости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку несколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведение 1 : 10 000), или замораживают.

Принципиальная схема микробиологического исследования.

Диагностика инфекционных болезней включает в себя комплекс исследований: эпизоотологические, клинические, патологоанатоми-ческие, микробиологические. При важности каждого из них и ценности именно комплексного подхода микробиологическое исследование особенно важно, поскольку с его помощью либо непосредственно обнаруживают этиологический (причинный) агент болезни, либо косвенными специфическими иммунологическими методами доказывают его присутствие.

Микробиологическое исследование состоит из следующих этапов;

1. Обнаружение возбудителя непосредственно в исследуемом
материале без изоляции в виде чистой культуры на питательных
средах с помощью разных методов:

неиммунологические методы: а) выявление возбудителя путем микроскопического исследования окрашенных (по Граму и др.) мазков-отпечатков из органов и тканей; б) обнаружение при помощи генетических методов (генные зонды, ПЦР) нуклеиновых кислот возбудителя;

иммунологические методы: выявление антигенов возбудителя с помощью различных серологических реакций (РП, РДП, МФА, ИФА, РИГА и др.).

2. Обнаружение возбудителя (его токсинов) с помощью био
пробы: заражение исследуемым материалом чувствительных лабо
раторных животных.

Выделение культуры возбудителя из исследуемого материа
ла путем посева на питательные среды.
Идентификация выделенной культуры микроорганизмов по
совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных,
ферментативных и патогенных свойств. При этом широко исполь
зуют серологические (РА, РП, РДП, ИФА и др.), а в случае необ
ходимости генетические методы идентификации изолированных
микроорганизмов.

5. Серологическая (ретроспективная) диагностика. Обнаруже
ние специфических следов пребывания возбудителя — антител в
сыворотке крови исследуемых животных при помощи различных
серологических реакций (РА, РСК, ИФА и др.). Серологические
реакции наиболее широко применяют при диагностике хроничес
ки протекающих бактериозов.

Аллергические исследования в отличие от перечисленных выше методов проводят непосредственно на животных в хозяйстве: при помощи диагностических аллергенов выявляют состоя-

ние гиперчувствительности замедленного типа. Аллергическую пробу в основном применяют для иммунологической диагностики хронических бактериозов.

Изложенная схема отражает возможные, но не обязательные направления микробиологических исследований. При каждой конкретной инфекции схему исследования строят с учетом особенности биологии возбудителя и инфекционного процесса.

Определение патогенности.

Патогенность микроорганизма, выделенного при исследовании патологического материала, определяют с помощью биологической пробы (биопробы), т. е. заражением лабораторных животных: белых мышей и крыс, морских свинок, кроликов, голубей, кошек, а также собак (чаще щенков), кур, мелкого и крупного рогатого скота (телят), обезьян, лошадей и др. Выбор вида животного для биопробы основывается на его восприимчивости к исследуемому объекту. Для биопробы берут не только выделенную микробную культуру, но и непосредственно патологический материал, из которого для этой цели готовят взвесь растертой в стерильной ступке ткани органов, гной, слизь, разбавленные физиологическим раствором. Биологическая проба необходима также при установлении безвредности биологических препаратов (вакцин, сывороток).

Помещение для содержания лабораторных животных (виварий) должно иметь несколько отделений: карантинное, клиническое для выполнения определенных работ (взятие крови, заражение, вскрытие и др.), кладовую, кухню и др. Перед заражением животных метят: кроликов и морских свинок — металлическими сережками с номерами, белых мышей и крыс — раствором краски (фуксина, метиленовой сини и др.) (рис. 39).

Для удобства и безопасности работы животных фиксируют (рис. 40 и 41). Морских свинок помощник держит брюшком вверх так, чтобы средний палец левой руки находился на шее, а большой и 'указательный — под передними конечностями, правой рукой при

_Рис _39. ключ к мечению зараженных животных
держивают задние конечности. Мышь берут одной рукой за кончик хвоста, другой — за кожную складку затылка, ближе к ушам, и повертывают в удобное для манипуляции положение.

Крыс фиксируют корнцан гами, захватив складку

Рис. 40. Фиксация и заражение мышей

Рис. 41. Фиксация и заражение морских свинок

кожи затылка, плотно прижимают голову к поверхности стола, другой рукой держат за хвост и поворачивают в удобное положение, оттягивая корнцангом голову.

Животных заражают следующими методами: накожным (скарификация), внутрикожным, подкожным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, оральным, интраназальным, интрацеребральным и в переднюю камеру глаза. Используемые при этом инструменты (шприцы, иглы и др.) должны быть стерильными.

При скарификации скальпелем делают небольшой надрез кожи — насечку и в нее апплицируют исследуемый материал или бактериальную культуру. Испытуемый материал можно также втирать жесткой щеточкой. Место заражения выстригают и дезинфицируют.

При внутрикожном способе пальцами левой руки оттягивают кожу и в образующуюся между ними кожную складку вводят кончик иглы. Вводимая доза материала не должна превышать 0,2 мл. Показатель правильного введения — небольшая припухлость величиной с горошину.

При подкожном инфицировании пальцами левой руки оттягивают кожу; у кроликов — со стороны спины несколько сбоку, у белых мышей и крыс — со спины ближе к основанию хвоста. В образовавшийся «кармашек»-складку вводят иглу шприца, затем его содержимое. Объем вводимого вещества не должен превышать для мышей 1 мл, для крыс, морских свинок— 10 мл, кроликов — 20...25 мл.

При внутримышечном заражении инъецируемый материал чаше вводят с внутренней поверхности бедра. Голубей и

кур можно заражать также и в грудную мышцу. Доза введения мышам составляет 0,5 мл, морским свинкам и крысам — 3...5 мл, кроликам — 5...8 мл. Большой объем лучше вводить дробно в 2...3 места.

При внутрибрюши ином заражении животное фиксируют головой вниз, иглу шприца вводят в нижнюю треть живота, чуть отступя от белой линии.

Внутривенно исследуемый материал кроликам вводят в краевую вену уха, мышам и крысам — в вену хвоста. Перед заражением место инъекции протирают тампоном, смоченным ксилолом или теплой водой, чтобы вызвать наполнение сосудов кровью.

При интрацеребральном заражении животных фиксируют в спинном положении. У кроликов для этой цели трепанируют череп в участке между надбровным углом и черепным гребнем. Поле операции выстригают, дезинфицируют, пальцами левой руки растягивают кожу над глазницей параллельно черепному гребню и рассекают ее (раздвигают ее края), крестообразно разрезают надкостницу, маленьким трепаном прокалывают черепную кость и извлекают небольшой кусочек ее; из шприца вводят 0,2 мл исследуемого материала. После этого соединяют края надкостницы, края кожной раны заливают коллодием.

У мышей и крыс трепанацию не делают, а легким проколом костной ткани вводят кончик иглы и инъецируют материал.

Интраназально заражение осуществляют капельным способом, используя глазную пипетку. Предварительно животное слегка наркотизируют — к носу прикладывают вату, смоченную эфиром.

При оральном заражении исследуемый материал добавляют в корм, воду или вводят через небольшой зонд.

В случае гибели зараженного животного труп вскрывают, соблюдая правила асептики, и производят бактериологическое исследование.

Для вскрытия труп фиксируют в спинном положении (брюшком вверх) на деревянной доске или лотке с застывшим парафином; конечности растягивают и закрепляют мелкими гвоздиками. Кожно-шерстный покров дезинфицируют 5%-м раствором фенола или лизола. Разрезают кожу вдоль белой линии от промежности до грудино-ключичного сочленения, а затем делают поперечные надрезы (рис. 42). Отпрепарированные кожные лоскуты отводят в сторону. Так же надрезают брюшину, вскрывают брюшную полость, подрезают ребра, диафрагму, вскрывают грудную полость. При вскрытии обращают внимание на патологоанатомическую картину.

После этого прижигают поверхность сердца, печени, почки и других органов, пипеткой прокалывают нужный участок, насасывают небольшое количество крови и высевают ее на питательные среды, соблюдая стерильность. Если в органах имеются очаги поражения, то из них пастеровской пипеткой также производят посев на питательные среды. Наряду с посевами готовят и препараты-отпечатки из тканей органов: отрезают кусочек печени, селезенки, почки, лимфатических узлов и к поверхности разреза прикладывают предметное стекло; препарат высушивают, фиксируют, окрашивают и микроскоп ируют.

После окончания работы трупы утилизируют: помещают в металлические бачки, заливают хлорноизвестковым молоком или 5...10%-м раствором хлорной взвеси, затем сжигают.

Вирулентность (токсигенность) микроба измеряют в специальных условных единицах: абсолютная летальная доза {Del — dosis certae letalis) вызывает гибель 100 % зараженных животных; 50%-я летальная доза (LD50) — 50 % зараженных животных; 50%-я инфицирующая доза (Ш₅₀) вызывает заболевание у 50 % зараженных животных. LD₅q и Ш₅о — наиболее точные показатели, поскольку отражают чувствительность к возбудителю (токсину) большинства взятых в опыт животных, a Del показывает чувствительность наиболее устойчивых особей.

Для расчета LD50 исследуемой культуры микроорганизма используют один из приведенных методов. Готовят суспензию бактерий с известным содержанием микробных клеток в единице объема. Затем делают последовательные (2, 5, 10-кратные) разведения суспензии на стерильном физиологическом растворе и равные объемы каждого разведения вводят (подкожно, внутрибрюшинно и т. д.) чувствительным лабораторным животным. Если определяют летальный эффект, то учитывают число погибших животных и рассчитывают LD₅o ■ Поскольку обычно ни одна из доз возбудителя не приводит к гибели строго 50 % зараженных животных, то LD₅o определяют статистическими методами.

Тест на плазмокоагулазу. Коагулаза — фермент бактерий (стафилококков), который в сочетании с некоторыми компонентами сыворотки коагулирует плазму. Благодаря коагула-зе вокруг стафилококковых поражений образуется фибринозный барьер, облегчающий персистенцию бактерий в тканях, кроме того, отложения фибрина на поверхности бактериальных клеток затрудняют их фагоцитоз.

Бактериальную массу исследуемой культуры, снятой петлей с поверхности агаровой среды, смешивают с 0,5 мл плазмы крови кролика (человека), не разведенной или разведенной стерильным физиологическим раствором в соотношении 1: 4, инкубируют при 37 °С; результаты учитывают через 4 и 24 ч. Положительная реакция — образование сгустка.

Тест на гиалуронидазу. Гиалуронидаза — фермент, расщепляющий гиалуроновую кислоту и, как следствие, деполиме-ризуюший межклеточное вещество. Рассматривают как фактор инва-зивности бактерий. Получение гиалуронового субстрата (из пупочных канатиков)—довольно сложная процедура. На практике удобнее использовать тест декапсуляции бактерий. В качестве субстрата в этом случае берут культуры бактерий, в капсульном веществе которых есть гиалуроновая кислота (P. multocida серовар A, S. equi).

На поверхность агара в чашке Петри дробно засевают культуру P. multocida или S. equi. Затем в виде линии высевают на поверхность среды культуру микроорганизма, у которого выявляют способность к синтезу гиалуронидазы. Чашки с посевами инкубируют 16...24ч при 37 °С. Если исследуемый микроорганизм выделяет гиалуронидазу, то она диффундирует в толщу питательной среды и разрушает капсулу тест-микроба. При анализе посевов в косо-проходящем пучке света колонии S. equi (P. multocida) вблизи «штриха» исследуемой культуры мелкие, серого или голубого цвета в отличие от флуоресцирующих отдаленных колоний.

Тест на гемолизин. Бактериальные гемолизины — обширная группа веществ-мембранотоксинов, которые вызывают нарушение целостности мембраны эритроцитов и их лизис.

Исследуемую культуру уколом или дробно засевают в чашки Петри с 5%-м кровяным агаром; посевы инкубируют 24 ч при 37 "С. Гемолизин, выделяемый растущей культурой бактерий, диффундирует в толщу агара и вызывает лизис эритроцитов, что проявляется в виде светлой (бета-гемолиз) или полупрозрачной (альфа-гемолиз) зоны вокруг колоний. Гемолитическую активность микроорганизма можно также определять при посеве в 1...5%-й кровяной бульон, который после культивирования выделяющего гемолизин микроба становится прозрачным за счет лизиса эритроцитов.

Тест на фибринолизин (стрептокиназу). Многие гемолитические стрептококки образуют стрептокиназу, которая активирует протеолитический фермент плазмы (плазминоген — плазмин), этот фермент —фибринолизин растворяет коагулированную плазму.

Исследуемую культуру микроорганизма засевают в виде «бляшки» на агар с 12% цитрированной плазмы. Посевы инкубируют 23...24ч при 37 °С. Положительный результат —появление зоны просветления вокруг колонии.

Тест на лецитиназу. Лецитиназа расщепляет при гидролизе лецитин. Состав желточного агара: пептон — 20 г, гидрофосфат натрия —2,5г, натрий—1 г, 0,5%-й раствор сульфата магния —0,1 мл, глюкоза— 1 г, агар— 12,5 г, вода дистиллированная — 500 мл. Устанавливают рН 7,2...7,4, стерилизуют 15 мин при 121 °С, охлаждают до 55 X, добавляют один стерильный желток на 500 мл среды, компоненты перемешивают и смесь разливают в чашки Петри.

Исследуемую культуру засевают дробно; культивируют 24...48 ч при 37...38 "С. Положительный результат —появление зоны помутнения вокруг колоний.

Тест на ДНК-азу. Исследуемую культуру бактерий засевают «штрихом» на питательный агар с ДНК и культивируют 24 ч при 37 "С. Затем на поверхность среды с бактериальной культурой наливают 1н. раствор соляной кислоты. Положительный результат — при гидролизе ДНК светлая зона вдоль «штриха» культуры.

Питательная среда с ДНК: в расплавленный МПА добавляют 10%-й раствор ДНК до конечной 0,2%-й концентрации, перемешивают компоненты, автоклавируют 15 мин при i 20 "С и разливают в чашки Петри.

Тесты на другие ферменты. Как факторы пато-генности можно рассматривать ферменты, катализирующие реакции с образованием токсических продуктов, например: уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака; декар-

боксилаза декарбоксилирует аминокислоты с образованием аминов и др.

Тест на адгезии ы. В адгезии бактерий принимают участие различные компоненты оболочки. Это свойство выявляют по способности исследуемого микроорганизма сорбироваться на различных эукариотических клетках (эритроциты, энтероциты) или других частицах (латекс). Еще один метод обнаружения адге-зинов связан с их использованием в качестве антигенов в серологических реакциях.

У эшерихий адгезивные свойства часто определяют по их способности агглютинировать эритроциты. В лунки планшетов вносят по 50 мкл 4%-й суспензии отмытых эритроцитов морской свинки, 1%-й раствор О-маннозы, суспензию исследуемых бактерий с концентрацией клеток 10⁹/мл. Параллельно ставят реакцию в отсутствие маннозы. Результат учитывают через 30...60 мин. Положительная реакция— склеивание и оседание эритроцитов в виде «зонтика». Торможение агглютинации маннозой обозначают как маннозочувствительную ГА (гемагглютинация), отсутствие ингибирования — как маннозорезистентную ГА.