Практикум по ветеринарной микробиологии

Скачать 3.35 Mb.

Название	Практикум по ветеринарной микробиологии
страница	1/27
Тип	Учебники и учебные пособия

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Учебники и учебные пособия

1 2 3 4 5 6 7 8 9 ... 27

УЧЕБНИКИ И УЧЕБНЫЕ ПОСОБИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ

ВЫСШИХ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ

В. Н. КИСЛЕНКО

ПРАКТИКУМ

ПО ВЕТЕРИНАРНОЙ

МИКРОБИОЛОГИИ

И ИММУНОЛОГИИ

Допущено Министерством сельского хозяйства РФ в

качестве учебного пособия для студентов высших

учебных заведений, обучающихся по специальности

«Ветеринария»

МОСКВА «КолосС» 2005

УДК 619: 579(075.8) ББК 48я73 К44

Редактор Т.С. Мояочаева
Рецензенты: доктор ветеринарных наук, профессор В. И. Плешакова (Институт веете

ринарной медицины Омского ГАУ); доктор ветеринарных наук, профессор IT. И. Ба

рышников (Институт ветеринарной медицины Алтайского ГАУ)

Кисленко В. Н.

К44 Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. — М.: КолосС, 2005.— 232 с. [2] л.: ил. — (Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений). ISBN 5-9532-0332-2

Практикум состоит из двух разделов. Раздел «Общая микробиология» содержит сведения о правилах работы в бактериологической лаборатории, описание основных микробиологических, генетических и иммунологических методов изучения микроорганизмов. В разделе «Возбудители инфекционных болезней» перечислены методы лабораторной диагностики, дифференциации возбудителей и дан перечень применяемых биопрепаратов.

Приведены методические указания к проведению практических занятий для преподавателей.

Прилагаются комплекты тестов на электронном носителе (CD-диске) по общей и частной микробиологии, иммунологии, а также по теоритическому курсу.

Для студентов высших учебных заведений по специальности «Ветеринария».

ВВЕДЕНИЕ

Ветеринарные лаборатории — это учреждения государственной ветеринарной службы, деятельность которых направлена на обеспечение благополучия в животноводстве, предупреждение и ликвидацию болезней и гибели животных, а также на охрану населения от болезней, общих для животных и человека. По назначению ветеринарные лаборатории бывают районные, межрайонные (зональные), областные (краевые) и республиканские.

Основная задача ветеринарных лабораторий — установление точного диагноза болезней сельскохозяйственных животных, включая птиц, пушных зверей, рыб и пчел, а также проведение экспертизы мяса, молока и других пищевых продуктов животного и растительного происхождения. В лабораториях также выполняют научные работы, осуществляют производство некоторых биостимуляторов, антибиотиков и др.

Материалом для лабораторных исследований служат кровь, моча, мокрота, молоко, фекалии, содержимое абсцессов (гной), полученные при жизни животного; кусочки паренхиматозных органов или других тканей после их гибели, пробы объектов окружающей среды (вода, воздух, почва, корма, растения, смывы с предметов ухода). Материал в лаборатории исследуют бактериологическими, серологическими, гистологическими, биохимическими, микологическими и токсикологическими методами, для чего должны быть созданы необходимые условия (специально отведенные помещения, оборудование, микроклимат и др.).

Лаборатория занимает отдельное здание, расположение вдали от проезжих дорог. В ней должны быть приемное отделение, пато-логоанатомический, бактериологический, серологический, биохимический и вирусологический отделы, а также специальные помещения для термостатов, мытья посуды, автоклавная. В комнате для мытья посуды находятся столы, раковины, горячее и холодное водоснабжение, газовая или электрическая плита, стеллажи для вымытой посуды, вытяжной шкаф, эмалированные ванны, тазы и другие емкости, раствор кислоты в стеклянных сосудах для обеззараживания пипеток, предметных стекол и другой посуды. Отдельное помещение отводят под бактериологическую кухню (средова-рочная), где готовят питательные среды для культивирования микроорганизмов, подготавливают посуду для стерилизации. Здесь же в шкафах хранят стерильную посуду и хорошо упакованные химические вещества, компоненты питательных сред.

Для выполнения работы в асептических условиях оборудуют специальные изолированные помещения — боксы (англ. box — коробка), состоящие из собственно бокса и предбоксника. Используют также настольные боксы, предметы и воздух в которых обеззараживают лампами УФИ, и ламинарные шкафы, где кроме этого применяют активное удаление воздуха.

Лабораторных животных (белых мышей, морских свинок, белых крыс, кроликов и др.) размещают в виварии. Как правило, в виварии содержат также здоровых баранов-доноров, кровь которых используют для реакции связывания комплемента (РСК) и приготовления питательных сред. Зараженных лабораторных животных содержат в изолированном помещении.

Кроме того, в здании есть комнаты для специалистов, обслуживающего персонала, кабинет заведующего, библиотека, весовая, раздевалка, склад и др.

Чтобы поддерживать надлежащую чистоту, пол в комнатах покрывают линолеумом или кафельной плиткой. Стены и потолки, как правило, гладкие (без карнизов и лепных украшений), с закругленными углами, окрашенные в светлые тона масляной краской. Потолки можно белить известью. Желательно стены облицевать пластиком или плиткой от пола до потолка.

В лаборатории должны быть горячая и холодная вода, канализация, педальные ведра для мусора, которые ежедневно освобождают, моют и дезинфицируют, полотенца, мыло и дезинфицирующий раствор. В комнатах находится только самое необходимое оборудование: столы, шкаф для хранения мелкой аппаратуры, красок, реактивов, посуды, инструментов и т. п. Столы обычно устанавливают перед окнами. Они должны быть устойчивыми, удобными, высотой 80 см, с закраинкой. Поверхность столов покрывают пластиком или линолеумом, стеклом или белой специальной краской. На столе размещают микроскоп, а также необходимые предметы для бактериологической работы.

Бактериологический метод исследования, как правило, включает микроскопию, выделение и изучение свойств чистой культуры возбудителя болезни и заражение лабораторных животных (биологическую пробу). Результаты бактериологического анализа за подписью заведующего отделением или директора лаборатории сообщают только официальным лицам: ветеринарному врачу, зоо-инженеру, руководителю предприятия.

Оборудование микробиологической лаборатории.

Для работы в лаборатории необходимы следующие приборы и аппараты: биологические иммерсионные микроскопы с дополнительными приспособлениями (осветитель, фазово-контрастное устройство, тем-нопольный конденсор и др.), люминесцентные микроскопы, термостаты, аппаратура для стерилизации, рН-метры, аппараты для

получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, технические и аналитические весы, аппаратура для фильтрования (фильтр Зейтца и др.), водяные бани, холодильники, аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов (бактериологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.), лабораторная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки) и др.

В лаборатории выделено специальное место для окраски микроскопических препаратов, где находятся растворы специальных красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой, банкой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препаратами и другими лабораторными материалами. В крупных лабораториях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки серологических реакций.

Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и других целей предназначена следующая аппаратура:

Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов составляет 37 "С. Термостаты бывают воздушшными и водяными.
Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.
Холодильники. Используют в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, сывороток, вакцин и прочих биологических препаратов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов ниже 0°С предназначены низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура —20 "С и ниже.
Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток, разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях используют центрифуги с различными режимами работы.
Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Предназначен для воздушной стерилизации лабораторной посуды и других материалов.
Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для стерилизации паром под давлением. В микробиологических лабораториях используются автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, переносные).

Правила работы в микробиологической лаборатории.

Микробиолог имеет дело преимущественно с чистыми культурами микроорганизмов, которые являются потомством одной клетки. Поскольку в воздухе и на поверхности предметов в лаборатории (на столах, приборах, инструментах, а также на одежде, руках и др.) всегда присутствует множество разнообразных микроорганизмов, следует постоянно заботиться о сохранении чистоты изучаемых культур. Поэтому при работе в микробиологической лаборатории необходимо строго соблюдать определенные правила, одно из которых — поддержание чистоты, включая ежедневную гигиеническую уборку всех помещений.

Для уничтожения микроорганизмов в воздухе и на поверхностях существуют различные способы дезинфекции.

Воздух в лаборатории частично очищают проветриванием. Вентиляция резко снижает численность микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице температур снаружи и внутри помещения. Продолжительность проветривания не менее 30...60 мин.

Более эффективный и наиболее часто применяемый способ обеззараживания воздуха — воздействие ультрафиолетовым излучением (УФИ), обладающим высоким антимикробным действием и вызывающим гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов. Из-за слабой проникающей способности ультрафиолетовое излучение не проходит через обычное стекло и легко поглощается частицами пыли. Поэтому для стерилизации время облучения составляет от 30 мин до нескольких часов в зависимости от степени загрязненности воздуха.

В качестве источника УФИ используют бактерицидные лампы (УФЛ). Излучателем в них служит электрическая дуга, возникающая в парах ртути низкого давления и испускающая линейный спектр в ультрафиолетовой области, более 80 % энергии которого приходится на длину волны 2,5 нм.

Бактерицидная лампа представляет собой стеклянную трубку, вмонтированную между двумя электрическими контактами и включаемую в сеть через дроссель. Трубка изготовлена из специального стекла, пропускающего все лучи с длиной волны 2,5 нм и задерживающего излучение с длиной волны короче 2 нм. Следует помнить, что УФИ вызывает острое воспаление роговицы глаз с характерным слезотечением и светобоязнью вскоре после облучения. Поэтому для того чтобы прямые или отраженные ультрафиолетовые лучи не воздействовали на глаза, применяют защитные очки. В небольших помещениях при включенной бактерицидной лампе находиться нельзя.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории протирают растворами различных дезинфицирующих веществ. Обработка пылесосом удаляет с предметов пыль и значительную часть микрофлоры. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего используют 0,5...3%-й водный раствор хлорамина. Особенно тщательно следует дезинфицировать поверхность стола, на котором проводится работа с микроорганизмами. Ее необходимо протирать дезинфицирующим раствором как перед началом работы, так и после окончания. На рабочем столе недопустимы лишние предметы. Все реактивы и растворы должны быть снабжены этикетками и стоять на строго определенных местах. В лаборатории нельзя есть, пить, курить. Работать следует в халатах.

В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на плотных и в жидких питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы или чашки Петри. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Внесение клеток микроорганизмов в стерильную среду называют посевом, или инокуляцией. Посев (или пересев) микроорганизмов требует четкого соблюдения определенных правил, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами.

Посевы микроорганизмов в стерильные среды лучше всего осуществлять в особых помещениях — боксах. Бокс представляет собой небольшую изолированную комнату, разделенную перегородкой на две части. В основное рабочее помещение бокса входят через тамбур, имеющий раздвижную дверь, что исключает резкое перемещение воздуха и, следовательно, занесение извне посторонней микрофлоры. Оборудование бокса включает стол с легко-моющейся поверхностью, стул, газовую или спиртовую горелки, бактерицидную лампу, укрепленную в специальном штативе или смонтированную на потолке бокса. В боксе удобно иметь подсобный стол, на котором размешают необходимые во время работы предметы. Все оборудование бокса, его стены, пол и потолок периодически моют и протирают дезинфицирующими растворами. Перед работой бокс облучают бактерицидной лампой в течение 40...60 мин.

После посева пробирки или другие сосуды, в которых выращивают микроорганизмы, помещают в термостаты, где с помощью терморегуляторов поддерживается постоянная температура. Посуду с культурами микроорганизмов, подлежащими утилизации, подвергают автоклавированию, чтобы убить клетки, и только после этого моют. В посуду с плотными средами заливают дезинфицирующий раствор, который через сутки удаляют, а посуду моют. Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приводит к возникновению бактериального аэрозоля, представляющего опасность для здоровья сотрудников.

Все сотрудники лабораторий, а также кафедр микробиологии, аспиранты, студенты, приходящие на занятия и работающие в научно-студенческих кружках, прежде чем приступить к работе с заразным материалом (культуры патогенных микробов, трупы экспериментально зараженных животных, выделения больных животных, кровь и др.) обязаны ознакомиться и строго соблюдать следующие правила работы и техники безопасности в ветеринарных бактериологических лабораториях:

в помещение лаборатории входят только в специальной одежде: в халате, белой шапочке или косынке. Халат должен быть наглухо застегнут, волосы убраны под шапочку;

в лабораторию нельзя проносить посторонние веши, продукты питания. Портфели и сумки складывают в специально выделенном месте;

в помещении лаборатории категорически запрещается принимать пищу, пить и курить;

каждому работнику (студенту) под определенным номером выделяют рабочее место, микроскоп и другие принадлежности;

на рабочем месте должно находиться оборудование только для выполнения конкретного задания. Обычно это набор красок, колба с дистиллированной водой, сливная чашка, банки с чистыми и отработанными стеклами, бактериологическая петля, штатив, банка с дезинфицирующим раствором;

перед началом работы необходимо проверить наличие и исправность приборов, посуды, газовых горелок (спиртовок) и пр. О замеченных недостатках и неисправностях следует сообщить ответственному, а на учебных занятиях — преподавателю;

во избежание взрыва нельзя зажигать одну спиртовку (или газовую горелку) от другой; пользуются только спичками;

нельзя касаться проводов и контактных частей электросети металлическими и другими предметами;

студенты без ведома преподавателя или обслуживающего персонала не должны включать электроприборы и аппаратуру;

студенты приступают к выполнению задания только с разрешения преподавателя; ход работы должен строго соответствовать изучаемой методике;

каждый: сотрудник и студент должен соблюдать опрятность в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование;

материал, используемый на учебных занятиях, принимают за особо опасный;

при распаковке материала, присланного для исследования, необходимо соблюдать осторожность: банки снаружи обтирают дезинфицирующим раствором и ставят только на подносы или кюветы;

при исследовании поступившего материала и при работе с бактериальными культурами соблюдают общепринятые в бактериологической практике технические приемы, исключающие возможность инфицирования работника;

в процессе изучения возбудителей инфекционных болезней студенты должны усвоить особенности правил техники безопасности при работе с конкретными возбудителями;

вскрытие трупов экспериментальных (лабораторных) животных производят в специальной одежде на оборудованном столе с помощью необходимых инструментов, используя для этих целей кювету, залитую воском (или парафином). Инструменты после вскрытия на стол класть запрещается: их помещают в стакан с дез-раствором или обжигают над пламенем горелки;

при работе с жидким инфицированным материалом используют резиновые баллоны, соединенные с пипеткой;

жидкости, содержащие патогенных микробов, переливают над сосудом с дезинфицирующим раствором;

если в процессе работы патологический материал случайно попал на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором. При попадании зараженного материала на кожу, конъюнктиву, в ротовую полость принимают экстренные меры к обеззараживанию;

по окончании работы патологический материал, использованные культуры микроорганизмов, инструменты и поверхность стола обеззараживают;

в конце занятия бактериальные культуры и другой материал студенты должны сдать преподавателю, а рабочее место привести в порядок. Выносить из лаборатории пробирки с культурами, препараты (мазки) и другие предметы категорически запрещается;

патологический материал и бактериальные культуры, необходимые для дальнейшей работы, оставляют на хранение в закрытом рефрижераторе или сейфе;

перед уходом из лаборатории необходимо снять халат, руки тщательно вымыть и обработать йодированным спиртом. Выходить за пределы лаборатории в халатах запрещается;

соблюдение правил работы и техники безопасности на учебных занятиях по микробиологии контролируют дежурные. С техникой безопасности при работе на кафедре микробиологии студенты знакомятся на первом занятии, о чем расписываются в журнале.

Соблюдая перечисленные правила, сотрудник в лаборатории обеспечивает стерильность манипуляций и предупреждает возникновение внутри- и внелабораторного заражения.

Ведение лабораторных записей. Тетрадь для лабораторных работ служит документом, позволяющим контролировать правильность полученных данных. В нее должны быть занесены сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. Запись необходимо вести аккуратно, четко и в определенном порядке, например: 1) название опыта, дата его постановки и окончания; 2) объект исследования; 3) условия проведения опыта; 4) основной принцип используемого метода анализа; 5) результаты опыта.

Полученные результаты подробно описывают, цифровой материал сводят в таблицы, если необходимо, в графики, диаграммы, рисунки. Каждая лабораторная работа должна заканчиваться собственными наблюдениями и выводами, занесенными в рабочую тетрадь.

В процессе работы студенты овладевают техникой и методами микроскопирования, знакомятся с морфологией представителей различных групп микроорганизмов, осваивают подход к выделению чистых культур и их идентификации, изучают влияние условий и факторов среды обитания на рост и образование разнообразных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и знакомятся с некоторыми методами генетических исследований бактерий.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ