Оценка эффективности различных методов диагностики инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота
|
Скачать 355.17 Kb.
|
|
На правах рукописи ДВОЕГЛАЗОВ НИКОЛАЙ ГЕННАДЬЕВИЧ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИИ ВИРУСА ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук   Новосибирск – 2009 Работа выполнена в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Храмцов Виктор Викторович Официальные оппоненты: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Глотова Татьяна Ивановна, доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник Разумовская Валентина Владимировна Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет» Защита диссертации состоится 25 февраля 2009 г. в « 12 » ч. на заседании диссертационного совета Д.006.045. при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНСХБ СО Россельхозакадемии. Автореферат разослан « 16 » января 2009 г.  Учёный секретарь диссертационного совета, к.в.н. Стеблева Г.М.
Актуальность темы. Лейкоз крупного рогатого скота (ЛКРС) широко распространен в России, а также во многих странах мира. Известно, что ЛКРС зарегистрирован более чем в трети всех стран мира. В последнее время все больше поступает сообщений о вновь выявленных очагах его распространения в тех странах, где раньше его не регистрировали (W. Wittmann, 1993; J.L.F. Cordeiro et al., 1994; E.H. Birgel et al., 1995; A. Kurdi et al., 1999; А.S. Meas et al., 2000, 2002; K.G. Trono et al., 2001; A. Zaghawa et al., 2002). Данные о ликвидации лейкоза в ряде западных стран, а также сообщения об успехах на отдельных территориях нашей страны убедительно доказывают, что с лейкозом можно эффективно бороться вне зависимости от сложности ситуации (П.Н. Смирнов и соавт., 1989, 1992, 2004, 2005; В.В. Храмцов и соавт., 2000, 2005; В.В. Разумовская и соавт., 2003; В.И. Околелов и соавт., 2004; И.М. Донник и соавт., 2005; В.А. Апалькин и соавт., 2005; G. Schramm and А. Aragon, 1994; I. Schwartz and D. Levy, 1994). В большинстве зарубежных стран, где ведутся мероприятия по борьбе с лейкозом, или он ликвидирован, для оздоровительно-профилактической работы используют весь спектр современных методов диагностики. В Российской Федерации основным методом диагностики на лейкоз остается реакция иммунодиффузии (РИД). В некоторых отечественных и зарубежных публикациях были показаны преимущества иммуноферментного анализа (ИФА) в сопоставлении с РИД. При не меньшей специфичности, чувствительность ИФА на порядок превосходит РИД (М.М. Маурицас и соавт., 1985; В.М. Чекишев, 1992; С.А. Малоголовкин, 1997; Р.З. Файзулин и соавт., 1997; Л.А. Иванова, 2000; M.J. Burridge et al., 1982; K.W. Perlberg et al., 1984; V.K. Nguyen and R.F. Maes, 1993). Как у любого метода, у ИФА есть свои недостатки. Например, он, как и РИД, не позволяет отличать колостральные антитела от активных антител, продуцирующихся при вирусной инфекции. В этом случае высокая чувствительность ИФА может затруднять оценку нормы продолжительности колострального иммунитета, так как позволяет выявлять материнские антитела в более поздние сроки, чем РИД (С.А. Мурватуллоев и соавт., 1981; E. Forschner und D. Heiseke, 1988; K. Klintevall et al., 1991; D. Beier et al., 1998). У некоторых животных инфекция протекает атипично, без образования антител. Такие животные серологическими методами не выявляются и в дальнейшем могут служить источником новых вспышек инфекции в оздоровленных стадах (М.И. Гулюкин и соавт., 2002; В.А. Крикун, 2002; D. Beier et al., 1998). В подобных случаях актуальным является применение генно-молекулярных методов диагностики, таких как молекулярная гибридизация и полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР позволяет выявлять, по разным данным, на 10 – 42% больше инфицированных ВЛКРС животных, чем РИД или ИФА. Также при помощи ПЦР возможно отличить инфицированных телят от телят с колостральными антителами (Н.В. Кузнецова и соавт., 1997; Л.Б. Прохватилова и соавт., 1998; В.А. Бусол и соавт., 1999; Н.Т. Джапаралиев и соавт., 2000; Н.А. Мальцева, 2002; В.А. Апалькин и соавт., 2005; K.B. Mullis et al., 1986; H.M. Naif et al., 1990; А. Agresti et al., 1993; А. Popov et al., 1993; H. Poon et al., 1993; H. Fechner et al., 1996; U. Czarnik et al., 2000; S.E. Gutierrez et al., 2001; M. Rola and J. Kuzmak, 2002; D.W. Nagy et al., 2003; C.J. Kuckleburg et al., 2003). Однако в связи с тем, что все перечисленные методы имеют недостатки, актуальными являются исследования по оптимизации регламента для каждого метода в системе оздоровительно-профилактических мероприятий при лейкозе. Цель работы: провести сравнительное изучение эффективности существующих методов диагностики ВЛКРС-инфекции (РИД, ИФА и ПЦР) и оптимизировать регламент их применения в системе оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза. Задачи исследований: 1. Провести сравнительный анализ диагностической эффективности методов РИД и ИФА в сопоставлении с результатами ПЦР на крупном рогатом скоте неблагополучных по лейкозу хозяйств. 2. Оптимизировать регламент применения методов РИД, ИФА и ПЦР в системе оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза. Научная новизна работы. Установлено, что относительное содержание антител к ВЛКРС в сыворотке крови коров выше, чем у молодняка крупного рогатого скота. Так, у взрослых животных этот показатель, по результатам ИФА, составил 42,29 о.е. (для отрицательных в РИД), 75,46 о.е. (для слабоположительных в РИД, титр антител от 1:1 до 1:4) и 85,45 о.е. (для положительных в РИД, титр антител свыше 1:8), у телок случного возраста – 35,59 о.е., 49,23 о.е. и 78,25 о.е. соответственно. Проведенный на репрезентативном поголовье сравнительный анализ эффективности методов РИД, ИФА и ПЦР при диагностике ВЛКРС-инфекции показал, что ни один из этих методов не позволяет полностью выявить всех животных-вирусоносителей. Так, эффективность РИД составила 76,1%, ИФА – 83,3%, ПЦР – от 58,3 до 72,6%. Научно обоснован регламент использования ИФА и ПЦР в хозяйствах с разной эпизоотической ситуацией по ВЛКРС-инфекции. Практическое значение работы. Инструментальный вариант учета результатов ИФА в сопоставлении с визуальным позволяет дополнительно выявлять до 2% инфицированных животных, так как пробы сыворотки крови, дающие сигнал менее 30 о.е. при инструментальном учете, при визуальном оцениваются как сомнительные. Предложен вариант применения ИФА в системе общепринятых методов диагностики инфекции ВЛКРС, который предусматривает регламент исследования животных в зависимости от напряженности эпизоотической ситуации по лейкозу. С целью рационального использования ИФА рекомендуется применять данный тест при первичном разделении неблагополучного стада и на завершающей стадии оздоровления. Оптимизирован регламент применения тест-систем РИД, ИФА и ПЦР при диагностике ВЛКРС-инфекции. Результаты исследований использованы при разработке методических рекомендаций. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Результаты сравнительного изучения эффективности тест-систем РИД и ИФА в сопоставлении с ПЦР при диагностике ВЛКРС-инфекции. 2. Оптимизированный регламент применения РИД, ИФА и ПЦР в системе оздоровительно-профилактических мероприятий при ВЛКРС-инфекции. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии (2002-2004 гг.); научно-практической конференции, посвященной 70-летию Иркутской НИВС (Иркутск, 2002); международной научно-практической конференции «Современные проблемы эпизоотологии» (Новосибирск, 2004); международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005); Сибирской Межрегиональной научно-практической конференции (Новосибирск, 2008). Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 8 научных работ, в том числе одна - в журнале «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», рекомендованном ВАК РФ. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 4 рисунками. Список использованной литературы включает 245 источников. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнена в лаборатории лейкозов Государственного научного учреждения Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ГНУ ИЭВСиДВ) СО Россельхозакадемии и лаборатории биоинженерии Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии (ГНЦ ВБ) «Вектор» в 2002-2008 гг. Объектом исследования служил интактный, инфицированный ВЛКРС и больной лейкозом крупный рогатый скот в возрасте 3-7 лет и телки случного возраста из хозяйств Новосибирской области. Предметом исследования были: пробы периферической крови, сыворотки крови, ДНК животных и процедуры сопоставления эффективности тест-систем. Для сравнительного изучения эффективности существующих методов диагностики ВЛКРС-инфекции были проанализированы результаты серологических (РИД, ИФА), гематологических и молекулярно-генетических (ПЦР) исследований животных. Диагностические исследования крупного рогатого скота на лейкоз и инфекцию ВЛКРС проводили в соответствии с Методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота, утвержденными ДВ МСХ РФ (М., 2000). Серологические исследования (РИД, ИФА) проведены на поголовье крупного рогатого скота разных возрастных групп из благополучных и неблагополучных хозяйств. Всего исследовано 3500 животных. Комплексные серологические, гематологические и молекулярно-генетические исследования сыворотки крови, крови и ДНК животных проведены на 120 головах крупного рогатого скота из неблагополучных хозяйств Новосибирской области. Серологические методы. Антитела к ВЛКРС выявляли с помощью реакции иммунодиффузии в агаровом геле (РИД), используя набор Курской биофабрики согласно наставлению производителя (фирма «Биок», г. Курск). Иммуноферментный анализ (ИФА) проводили в соответствии с наставлением по применению (производство НПО «Нарвак», г. Москва). Учет и интерпретацию результатов реакции осуществляли визуально и инструментально. Гематологический метод. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов в 1 мкл периферической крови производили методом микроскопирования в камере Горяева, а лимфоцитов – методом фазово-контрастного микроскопирования с применением КФ-4 по методике С.С. Бирбина в модификации П.Н. Смирнова, А.Т. Левашева (1989). Выделение образцов ДНК из лейкоцитов периферической крови проводили в лаборатории биоинженерии ГНЦ ВБ «Вектор» по методу К. Смита и соавт. (1990) с небольшими модификациями. Молекулярный метод (ПЦР). Образцы ДНК исследовали в ПЦР при помощи набора для экспресс-индикации ДНК профага вируса лейкоза КРС (ВЛКРС) методом полимеразной цепной реакции согласно инструкции по применению производства «Лагис» (Россия). А также в «Nested» - ПЦР для сегмента гена env (444-bp) ВЛКРС по методу, описанному M. Licursi et al. (2002). Олигонуклеотидные праймеры синтезировали на автоматическом синтезаторе ASM 102 (фирма «Биосет»). Продукты амплификации анализировали электрофорезом в 2%-м агарозном геле (AGAROSE, ICN Biomedicals inc) с последующим окрашиванием в растворе бромистого этидия с концентрацией 1 мг/мл (Т. Маниатис и соавт., 1984). В качестве маркера молекулярного веса использовали 100 bp («СибЭнзим», г. Новосибирск). Визуализацию электрофореграмм проводили при помощи УФ-трансиллюминатора УВТ-1 («Biokom», Россия). Статистическая обработка цифровых данных, полученных в результате экспериментальных исследований, была выполнена на персональном компьютере с использованием стандартных программ и включала подсчет средних арифметических (М), стандартных ошибок (m), стандартных отклонений (σ) и коэффициентов корреляции (r). Уровень значимости вариационных рядов оценивался параметрическим t-критерием Стьюдента (Ю.Г. Попов и соавт., 2000). Автор выражает благодарность сотрудникам лаборатории биоинженерии ГНЦ ВБ «Вектор», доктору биологических наук Туманову Ю.В. и сотрудникам лаборатории лейкозов ГНУ ИЭВСиДВ за оказанную помощь в подготовке работы. 2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Сопоставление результатов диагностических исследований крупного рогатого скота на инфекцию вируса лейкоза в РИД и ИФА В таблице №1 приведены объединенные данные сопоставления результатов РИД и ИФА на материале из нескольких неблагополучных по лейкозу хозяйств. Таблица 1 – Результаты исследований сыворотки крови в РИД и ИФА
Данные таблицы свидетельствуют о том, что ИФА является более чувствительным методом, чем РИД. Анализ, проведенный на большом поголовье крупного рогатого скота из хозяйств с разной степенью распространения инфекции, свидетельствует о том, что всегда удается дополнительно выявить при помощи ИФА животных, не выявленных в РИД. Зачастую это связано с недостаточным для предела чувствительности РИД низким уровнем иммунного ответа животного. В наших исследованиях при помощи ИФА удавалось дополнительно выявлять от 1,5 до 15,3% инфицированных животных из числа отрицательных в РИД. ИФА, как и РИД, можно с успехом использовать в хозяйствах для контроля благополучия по ВЛКРС. Для оценки работы ИФА на благополучных по лейкозу стадах параллельно с РИД исследовали 550 животных из хозяйств, свободных от ВЛКРС (учхоз «Тулинское», ОПХ «Элитное» и др.), иммуноферментным анализом. Результаты тестов были отрицательными. Анализ результатов исследований в ИФА проб сыворотки крови, сомнительных в РИД Предметом изучения являлись пробы сыворотки крови, учтенные при постановке в РИД как сомнительные. Реагирование таких проб проявлялось в основном в виде слабого утолщения или слабого размытия концевого участка контрольной линии преципитации. Так как чувствительность РИД зависит не от серии используемых реагентов, а определяется пределом чувствительности самой реакции, то и перестановка сомнительных проб в РИД не целесообразна. Поэтому, на наш взгляд, такие пробы необходимо дополнительно исследовать более чувствительным методом. В качестве такого метода использовали ИФА. Пробы до постановки в ИФА хранили при t = -20 °С. Всего было исследовано 137 проб сыворотки крови от коров. Из них 97 (71%) проб были положительными в ИФА, а соответственно 40 (29%) – отрицательными. Проведя инструментальный учет результатов, получили значения оптической плотности проб и провели математическую обработку результатов анализа. Самые низкие показатели относительного содержания антител в положительных в ИФА пробах соответствовали значениям 75-80 о.е., самые высокие достигали значений в 98-100 о.е. Учитывая эти данные можно предположить, что сыворотки со значениями относительного содержания антител ниже 80 о.е. не будут выявлены в РИД из-за недостаточной чувствительности метода, либо покажут сомнительный или слабоположительный результат. Надо отметить, что такие пробы чаще всего встречались в хозяйствах с низкой инфицированностью поголовья или в хозяйствах, где интенсивно ведется оздоровление от лейкоза. Количество сомнительных в РИД проб не превышало 5-10% от числа выявленных за исследование. Чем ближе к завершающему этапу оздоровления от лейкоза находится хозяйство, тем опаснее и недопустимее передержка в стадах инфицированных животных. А именно на этом этапе выявляются единичные животные, реагирующие, по литературным данным, в 80-100% случаев слабоположительно (А.Т. Левашев, 1992). В подобных ситуациях рациональнее будет исследовать все поголовье не при помощи реакции иммунодиффузии, а с применением иммуноферментного анализа, который в более короткие сроки позволит выявить всех инфицированных животных и удалить их из стада. Сомнительные в РИД пробы необходимо дополнительно исследовать в ИФА, для получения более объективных результатов. Сравнение визуальной и инструментальной оценки результатов ИФА Как известно, учет результатов иммуноферментного анализа предполагает как инструментальную, с помощью ридера, так и визуальную оценку. Для того чтобы узнать насколько эти способы учета информативны и сопоставимы, предварительно (до сканирования планшета в ридере) проводили визуальную оценку реакции. Полученные данные представлены в таблице 2. Таблица 2 – Результаты визуальной и инструментальной оценки ИФА
Выявлено, что около 2% положительных проб при визуальной оценке выпадают из поля зрения исследователя. Это те пробы, которые имеют слабый сигнал, около 30 о.е. и ниже (23,45±5,27, Р<0,001). В лучшем случае такие пробы могут быть учтены как сомнительные и переставлены, но гарантии, что сигнал будет выше, нет. Сомнительные в ИФА пробы при инструментальном учете в наших исследованиях регистрировали достаточно часто. В среднем около 3%, а при визуальной оценке 6,7%. Исходя из выше приведенных данных, очевидно, что использование тест-систем ИФА без специального оборудования для учета не целесообразно. Изучение взаимосвязи между возрастом и относительным содержанием антител у крупного рогатого скота Ранее проведенные нами исследования по сопоставлению результатов РИД и ИФА на большом поголовье крупного рогатого скота из разных хозяйств, разных возрастных групп, разной степени компрометации к лейкозу продемонстрировали различия как по количеству дополнительно выявленных в ИФА животных, так и по ряду других показателей (слабоположительные в РИД, реагирующие в РИД на две линии и др.). Слабоположительными считали те пробы, которые в РИД реагировали на один и два креста (+, ++), что соответствует титрам антител 1:1-1:2 и 1:2-1:4 соответственно. Положительными – пробы, реагирующие в РИД на три и четыре креста, т.е. в титрах антител выше, чем 1:8 (А.И. Испуллаев, 1993). Для установления взаимосвязей между отдельными показателями, такими как возраст животных, относительное содержание антител у реагирующих на ВЛКРС животных и количество дополнительно к РИД выявленных в ИФА животных, было выбрано модельное хозяйство, неблагополучное по ВЛКРС-инфекции, – ЗАО «Кубанское». В нем активно проводятся оздоровительные мероприятия по лейкозу, в том числе и с использованием ИФА. Как модельные были определены две, наиболее значимые в хозяйственном отношении, возрастные группы: коровы и телки случного возраста. В РИД и ИФА были исследованы образцы сыворотки крови от 428 коров и 490 телок случного возраста. Результаты представлены в таблицах 3 и 4. Таблица 3 – Результаты анализа сыворотки крови коров в РИД и ИФА
Примечание: +/- – сомнительные в ИФА; Из числа положительных в РИД: // - реагирующие в РИД на две линии, сл(+) – слабоположительные в РИД Из представленных данных видно, что по результатам РИД инфицированность поголовья коров составляет 15,4%, а в ИФА дополнительно выявлено 4,4% животных. Из 66 реагирующих в РИД коров у 27 реакция была отмечена как слабоположительная, а 6 реагировали на два антигена, что характеризует переход инфекционного процесса в следующую (гематологическую) стадию заболевания. Все 5 сомнительных в ИФА проб при перестановке показали отрицательную реакцию. Таблица 4 – Результаты анализа сыворотки крови телок в РИД и ИФА
Примечание: +/- – сомнительные в ИФА; Из числа положительных в РИД: // - реагирующие в РИД на две линии, сл(+) – слабоположительные в РИД Из таблицы 4 видно, что инфицированность ВЛКРС поголовья телок, согласно данным РИД – 19,4%, в ИФА дополнительно выявлено 1,5% животных. Из 95 положительно реагировавших в РИД телок слабоположительную реакцию показали 12 животных, на две полосы реагировали 3. Сомнительные в ИФА пробы при перестановке показали отрицательную реакцию. По результатам, представленным в таблицах 3 и 4, все животные были распределены по следующим группам: 1) РИД отрицательные, ИФА положительные (РИД-, ИФА+); 2) РИД слабоположительные, ИФА положительные (РИД сл+, ИФА+); 3) РИД и ИФА положительные (РИД+, ИФА+); 4) РИД и ИФА отрицательные (РИД-, ИФА-). В последней группе относительное содержание антител в ИФА не превышало 14 о.е., а в остальных группах их значения различались. Эти данные представлены в таблице 5. Таблица 5 – Показатели относительного содержания антител в сыворотке крови у коров и телок в разных по степени реагирования в РИД и ИФА группах, о.е.
При расчете критерия достоверности разности (ta) установили, что разница в содержании антител у коров в 1-й и 2-й группах высоко достоверна (Р<0,001), а во 2-й и 3-й не достоверна. В содержании антител у телок между 1-й и 2-й группой нет достоверной разницы, а между 2-й и 3-й разница высоко достоверна (Р<0,001). Относительное содержание антител по всем трем группам у взрослых животных выше, чем у телок. Причем, если в 1-й (РИД-, ИФА+) и 3-й (РИД+, ИФА+) группах нами не выявлено достоверной разницы, то во 2-й (РИД сл+, ИФА+) разница между коровами и телками достоверна (Р<0,001). Сопоставляя данные по уровню антител у коров и телок по группе животных, слабоположительных в РИД, можно предположить, что в формировании положительного сигнала в РИД участвуют не только IgG антитела, которые регистрирует ИФА, но и другие, присутствующие в сыворотке, например IgM. Известно, что в начале инфекционного процесса образуются IgM антитела, которые в дальнейшем замещаются в организме животного антителами группы IgG. Также, возможно, сигнал в РИД могут совместно с gp51 формировать антитела против других антигенов ВЛКРС. Коммерческий антиген, используемый в РИД, не отличается высокой степенью очистки и, как минимум, содержит кроме gp51 р24 антиген. Например, O. Kaaden и соавт. (1977) успешно использовали в РИД антиген р15. В данном случае правомерно предположить, что количественные изменения антител у телок напрямую связаны с переходом инфекционного процесса на новый уровень. В то время как для коров, небольшую разницу между слабоположительными и положительными в РИД группами, можно объяснить низкой специфичной чувствительностью РИД, для которой количества антител только IgG на уровне, определяемом в ИФА, ниже 75 о.е. не достаточно. Определяя степень реагирования (по количественному признаку), как качественную характеристику, предполагали возможное качественное различие между животными разных возрастов по характеру протекания инфекционного процесса, что должно находить отражение в уровне специфических противовирусных антител. При более низкой, по сравнению с телками (по данным РИД), инфицированности поголовья коров (15,4% у коров против 19,4% у телок) дополнительно в ИФА животных выявляется больше в этой же возрастной группе (4,4% против 1,5%). Это может являться подтверждением того, что реакция организма на внедрение ВЛКРС связана с возрастом животного, и инфекционный процесс у молодого и взрослого животного протекает не одинаково. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Похожие:
 |
Дорожная карта по профилактике и ликвидации заразного узелкового... Действия должностных лиц и собственников крупного рогатого скота при выполнении мероприятий |
|
Инструкция по применению Клинексина 5% для лечения бактериальных... Клинексина 5% для лечения бактериальных инфекций крупного рогатого скота и свиней |
|
Стрептококкоз крупного рогатого скота в краснодарском крае Клинические симптомы и патологоанатомические изменения при стрептококкозе |
 |
Технология убоя крупного рогатого скота, свиней и птицы Первичная переработка животных складывается из последовательно проводимых основных операций: оглушение, обескровливание, забеловка... |
|
Реферат Методы разведения сельскохозяйственных животных Биологические особенности крупного рогатого скота и народнохозяйственное значение отрасли |
|
Инструкция по монтажу, пуску, регулированию и обкатке изделия на... Транспортёр скреперный (в дальнейшем именуемый транспортёр), предназначен для уборки навоза крупного рогатого скота из открытых навозных... |
|
Документы и сведения, используемые для классификации товаров по тн вэд тс Мясо крупного рогатого скота, свинина, баранина, козлятина свежие, охлажденные или замороженные |
|
Ооо «ветпродукт» инструкция Неозидин (Neozidin) лекарственное средство для лечения и профилактики кровепаразитарных болезней у крупного рогатого скота, овец,... |
|
Агрегат кормовой многофункциональный акм-9 Предназначен для приема, измельчения и смешивания кормов, транспортирования и дозированной выдачи кормосмесей в кормушки на фермах... |
|
Методические рекомендации специальные ветеринарно-санитарные мероприятия... Б. В. Камалов Начальник Главного управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан, к в н |
|
Противопаразитарные средства для наружного применения Суминак 5 fl Назначение: предназначен для борьбы против эктопаразитов животных: крупного рогатого скота, овец, свиней, собак, кошек |
|
Токсическая дистрофия печени крупного рогатого скота В промышленных животноводческих комплексах, на специализированных фермах, а также среди животных в приусадебных хозяйствах на незаразную... |
|
Инструкция по применению Цефтонита для лечения бактериальных инфекций... ... |
|
Методические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике... Рекомендации разработаны авторским коллективом сотрудников фгу «фцтрб-вниви» и Главного управления ветеринарии км рт |
|
Диссертация «Нематодозы крупного рогатого скота при разной технологии... ... |
|
Ооо ветпродукт инструкция по применению Окситетрациклина 200 la для... Торговое наименование лекарственного препарата: Окситетрациклин 200 la (Oxytetracyclinum 200 la) |