Биопрепараты на основе бактерий рода
|
Скачать 3.26 Mb.
|
Рис.1.3. Структура Cry-токсина. Домен II заканчивается тремя петлями, которые взаимодействуют c рецепторами клеточных мембран (Li et al., 1991). Рентгеноструктурный анализ Cry белков B. thuringiensis обнаружил наличие трех составляющих их доменов [Grochulski et al.,1995; Garczynski, Siegel, 2007]. Домен I представляет пучок из 7 a-спиралей, одна из них опоясывает остальные шесть. Домен II состоит из трех антипараллельных b-структур. Бета-ленты каждой структуры заканчиваются тремя выступающими петлями. Домен III представляет сэндвич из двух b-структур. Проходя через перитрофическую мембрану, токсин связывается со специфическим участком (сайтом) на мембране цилиндрических клеток эпителия кишечника, затем образуются поры в мембране, через которые происходит проникновение в клетку токсина [Luthy, Wolfersberger, 2000]. При этом основная функция домена I заключается в увеличении проницаемости клеточных мембран, а домена II – в связывании с рецепторами. Связывание домена II с рецепторами – ключевой момент, отвечающий за специфичность действия. Для этого в структуре имеются специальные петли на конце домена II, которые зацепляются за рецепторы как за якорь. Охарактеризованы 4 типа рецепторов на примере Сry1А: кадхерин-подобный белок (CADR); гликозилфосфатидилинозитол (GPI), связанный с N-аминопептидазой (APN); GPI, связанный с щелочной фосфатазой (ALP); и 270-кДа гликоконъюгат (GCR) [Hua et al., 2004]. Рецепторы идентифицированы как белки или гликолипиды. В частности, рецептором для Cry 1Ac у капустной моли служит APN. Количество токсина, необходимое для гибели, определяется соответствием насекомого (его рецепторов) токсину. Так, гусеницы капустной белянки (массой 200-300 мг) погибают от 25-50 нг кристаллического белка, кодируемого cry1A генами, а для личинок комаров достаточно в 10 раз меньше белка, кодируемого генами cry4, cry10 и cry11. Домен III проявляет многофункциональность: защита токсина от протеолиза, связывание с рецепторами и участие в образовании ионных каналов. Его влияние имеет особое значение в случае эндотоксина двойного действия (против чешуекрылых и двукрылых) [Bravo et al., 2007]. При введении сублетальной дозы эндотоксина поврежденный эпителий способен восстановиться, а устойчивость насекомого к определенному подвиду связана с отсутствием связывания с рецепторами [Luthy, Wolfersberger, 2000; Garczynski, Siegel, 2007]. В этом аспекте интересно исследование, где показано, что невосприимчивость гороховой тли к токсинам Cry 1Ac Cry 3Aa определяется отсутствием связывания их с эпителием кишечника насекомых [Li et al., 2011]. Таким образом, краткая схема действия Cry-токсинов выглядит следующим образом: 1) связывание с рецептором мембран клеток, 2) внедрение токсина в клеточную мембрану с последующей олигомеризацией и образованием пор и/или ионных каналов в мембране, 3) осмотический дисбаланс и лизис клетки. Внешне это проявляется в прекращении питания в течение 1 часа вследствие паралича кишечника, а затем гибели через 1-2 дня. Поврежденный эпителий перестает быть барьером для бактериальной инфекции (проникновения спор). При растворении белкового эндотоксина B. thuringiensis патоварианта В образуется также Cyt-токсин, состоящий из единственного домена, включающего бета-слой, вокруг которого обвиты две альфа-спирали [Lopez , Ceron, 2007]. Механизм взаимодействия Сyt-токсина с клеточной мембраной отличается от механизма действия Сry-токсина [Маргалит, Бен-Дов, 2001; Ben-Dov, 2014]. Первоначальное связывание происходит с ненасыщенными фосфолипидами, поэтому токсин не действует на бактериальные протопласты, из которых удалены фосфатидилхолин, сфингомиелин и холестерол. Существенным здесь является ацилненасыщенность в определенном положении фосфолипида мембраны. Сначала токсин связывается как мономер, затем образует агрегаты, формируя поры в мембране. Молекулярная масса агрегатов 300-400 кДа, что эквивалентно 16 молекулам токсина. Формирование пор приводит к цитолизу. Однако по другим данным, Cyt A не создает хорошо сформированные каналы, а действует как детергент, разрушая структуру мембраны. Результаты работы К. Ду с соавторами [Du et al., 1999] показали, что С-терминальная часть Cyt A и Cyt B токсинов, состоящая из b-структур, внедряется в мембрану с образованием пор. По данным П. Бутко [Butko, 2003] токсичность кристаллов Bt ssp. israelensis обусловлена комбинацией четырех белков Cyt 1A, Cry 4A, Cry 4B и Cry 11A. Синергизм между Cyt 1A и Cry 11A увеличивает токсичность каждого в 4-5 раз в сравнении с их индивидуальным действием. Подробный механизм действия эндотоксина представлен в обзорах А. Браво с соавторами [Bravo et al., 2007, 2013]. Считают также, что на основе структурных особенностей токсинов их можно отнести к трем категориям: трехдоменный токсин тип α-PFT, Cyt-токсин тип β-PFT и аэролизины (параспорины) тип β-PFT [Xu et al., 2014]. К последним принадлежат токсины, поражающие раковые клетки человека. Что касается термостабильного β-экзотоксина (турингиензина), то долгое время считали, что он является антиметаболитом нуклеиновых кислот, механизм действия которого заключался в ингибировании синтеза ДНК-зависимой РНК-полимеразы (репликазы) [Farkas et al., 1976]. По последним данным, этот токсин представляет собой небольшую молекулу олигосахарида, включающую аденозин, глюкозу, фосфорную глюконовую кислоты с молекулярной массой 701 Да [Liu et al., 2014]. Вызывает тератогенез, наиболее ярко проявляющийся у взрослых насекомых. В головном отделе возможна атрофия или редукция глаз, усиков, ротового аппарата. Наблюдается атрофия или деформация конечностей и крыльев. Естественно, что нормальная жизнедеятельность таких уродливых особей невозможна. В первые же часы интоксикации наблюдаются качественные превращения гемоцитов. При инъекции в полость тела гусениц b-экзотоксин значительно токсичнее, чем при скармливании [Кандыбин, 1989]. Кроме того, разными авторами показано, что личинки старших возрастов более восприимчивы к экзотоксину, чем младшие. В комплексе со спорами и кристаллами экзотоксин действует как синергист [Bravo et al., 2007]. Содержание β-экзотоксина расширяет сферу применения B. thuringiensis за счет иного механизма действия экзотоксина по сравнению с эндотоксином. Экзотоксин может действовать не только через кишечник, но и через покровы насекомых, а в комбинации со спорово-кристаллическим комплексом проявляет синергизм. Поэтому экзотоксинсодержащие препараты рекомендованы не только против гусениц, но также против таких опасных вредителей, как колорадский жук Leptinotarsa decemlineata Say и паутинный клещ Tetranichus urticae Koch. Вызывает интерес еще один класс экзотоксинов B. thuringiensis - вегетативные инсектицидные белки (Vip-белки), активные против широкого спектра чешуекрылых насекомых [Lee et al., 2003; Garczynski., Siegel, 2007]. Эти белковые экзотоксины секретируются во время вегетативного роста некоторых штаммов B. thuringiensis. В частности, показано, что препарат секретируемых белков B. thuringiensis ssp. kurstaki (штамм 5м) вызывал гибель 60% гусениц черемуховой моли. Электрофоретический анализ данных секретируемых белков в SDS-PAGE показал, что у этого штамма присутствовал белок с молекулярной массой порядка 89 кДа [Калмыкова и др., 2009]. Это соответствует данным по вегетативному инсектицидному белку Vip 3А, который проявляет активность против широкого спектра личинок Lepidoptera, лизируя эпителиальные клетки среднего кишечника [(Donovan et al., 2001]. Индийские ученые [(Sattar et al., 2008] впервые продемонстрировали действие Vip-белка на насекомых отряда Homoptera, что особенно важно для биоконтроля численности этих фитофагов. В последующие годы интерес к вегетативным инсектицидным белкам стал возрастать [Hernandez-Rodriguez et al., 2009; Hernandez-Martinez et al., 2013; Silva et al., 2016]. При изучении действия токсина Vip 3Аа16 на гусениц двух видов насекомых: мельничной огневки Ephestia kuehniella и Египетской хлопковой совки Spodoptera littoralis показано, что узнавание рецепторов в кишечнике гусениц этим токсином определяет его активность в отношении разных насекомых- хозяев [Abdelkefi-Mesrati et al., 2011]. Выявляется все большее разнообразие экзотоксинов Vip3А. Так, Vip3Аа45 и Vip 3Аg4 из испанской коллекции B. thuringiensis, отличающиеся от Vip 3Аа1, высокотоксичны для гусениц трех видов насекомых [Palma et al., 2013], Vip3Ad нетоксичен для 8 видов насекомых, а Vip3Af проявлял активность только в отношении гусениц кукурузного мотылька Ostrinia nubilalis [Escudero et al., 2014]. Проанализирован механизм действия Vip3Аа и Cry1Ia10 токсинов B. thuringiensis на гусениц совок четырех видов Spodoptera spp. In vitro показано, что эти два токсина не конкурируют за один и тот же рецептор мембран ворсинок среднего отдела кишечника [Bergamasco et al., 2013]. При этом вегетативный инсектицидный белок более активен, чем Cry токсин, а их смешивание приводит к синергизму в отношении трех видов совок. Только в случае совки S. eridania выявлена возможность конкурирования токсинами за один рецептор, тогда более высокую активность проявляет Cry1Ia10 токсин. На примере озимой совки Agrotis segetum экспериментально доказано, что Vip3Аа16 специфически связывается с ворсинками среднего кишечника гусениц и не ингибирует при этом связывание Cry1Ас токсина с другим рецептором мембран ворсинок и наоборот. Авторы считают, что этот результат важен для использования Vip-токсина в качестве нового биоагента контроля численности насекомых [Hamadou-Charfi et al., 2013]. Экологические факторы, включающие абиотические и биотические, воздействуют на оба сочлена системы энтомопатогенная бактерия – хозяин при развитии патологического процесса насекомого под влиянием биоагента. Из абиотических факторов наиболее значимы температура, влажность и солнечный свет, из биотических – микрофлора окружающей среды, биологически активные вещества растений. Все эти факторы могут в разной степени влиять на течение инфекционного процесса и на сами патогены, сохраняющиеся в окружающей среде. Рассмотрим влияние основных экологических факторов, влияющих взаимодействие энтомопатогенных бактерий с фитофагами, что часто ведет к затруднениям в их использовании как основы биологических препаратов. Влияние температуры и влажности Температура и влажность, как правило, неоднозначно влияют на бактериальные агенты биологического контроля насекомых, как обитающих в естественных условиях, так и внесенных в биоценозы в составе биопрепаратов. Следует иметь в виду, что насекомые как пойкилотермные животные практически имеют температуру тела, равную температуре окружающей среды. В случае бактериальных инфекций насекомых, температура оказывает определенное влияние на сохранность вегетативных клеток, спор и токсинов энтомопатогенных бактерий, а также на течение инфекционного процесса. Влияние температуры на токсины B. thuringiensis зависит от их химической природы. Так, белковый дельта-эндотоксин значительно менее устойчив к температуре, чем бета-экзотоксин нуклеотидной природы. Температура достаточно сильно влияет на течение инфекционного процесса при заражении насекомых B. thuringiensis. Обычно оптимальная температура составляет 24…32°С, нижний температурный предел 13…15°С, верхний – 36…50°С (для разных пар хозяин-паразит) [Бурцева и др., 2001]. При изучении остаточной активности B. thuringiensis из трех бактериальных препаратов (Delfin, Dipel и Foray) в хвойном лесу установлено, что через 8 дней после обработки оставалось около половины первоначального количества бацилл при температурах 10…23оС [Gindin et al., 2007]. Эти данные свидетельствуют о значении температуры окружающей среды при внесении в биоценозы бактериальных энтомопатогенов для эффективного их использования. Влияние влажности на течение инфекционного процесса при действии энтомопатогенных бактерий незначительно. Однако при хранении в водной суспензии разрушение бацилл происходит гораздо быстрее, чем при хранении в сухом виде [Штерншис, 1995]. Влияние солнечной радиации Солнечная радиация, главным образом ультрафиолетовое облучение (УФО) - самый мощный фактор инактивации энтомопатогенных микроорганизмов. В лесных массивах влияние солнечного излучения несколько ослаблено за счет кроны. Существует некоторая разноречивость мнений относительно разной восприимчивости спор и кристаллов экзотоксина к УФО. Как правило, исследователи указывают на более высокую, а иногда абсолютную устойчивость кристаллов. Но имеется ряд отечественных и зарубежных работ, где отмечается, что под влиянием инсоляции эндотоксин инактивируется [Лескова, 1987], и в ряде случаев быстрее, чем споры Батурин, Батурина, 1987]. Для B. thuringiensis ssp. kurstaki продемонстрировано снижение инсектицидной активности спор и эндотоксина под влиянием солнечной и УФ- радиации. При этом соотношение скорости инактивации спор и скорости инактивации кристаллов под действием естественной солнечной радиации выше, чем это же соотношение под действием УФО [Петров и др., 1989]. Это подтвердили и данные зарубежных авторов [Pozsay et al., 1987; Pusztai et al., 1991]. В наших опытах по облучению спор и кристаллов эндотоксина уже через 20 минут при длинах волн 290-340 нм жизнеспособность спор уменьшалась в 30 раз, а для уменьшения количества кристаллов потребовалось облучение в течение 4 часов [Штерншис, 1995]. Под влиянием солнечной радиации разрушается, хотя и медленнее, и b-экзотоксин B. thuringiensis [(Кандыбин, 1989]. Так, количество экзотоксина на листьях и в поверхностном слое почвы снижается соответственно на 12 и 60% через 1 сутки после нанесения и на 75 и 86% через 15 суток. По данным К. Иньоффо [Ignoffo, 1992], под действием солнечной радиации активность эндотоксина и жизнеспособность спор на листьях уменьшается быстрее, чем активность b-экзотоксина. Другие факторы окружающей среды Интересно, что повреждение микроорганизмов под действием УФО зависит также от влияния кислорода воздуха. Высказана гипотеза [Ignoffo, Garcia, 1978], что при инсоляции энтомопатогенов поверхностные биомолекулы образуют органические перекиси, ответственные за уменьшение жизнеспособности и патогенности биоагентов. Известно, что поглощение света в живых организмах с участием фотосенсибилизаторов в присутствии кислорода ведет к процессам повреждения биологических объектов [Фут, 1979]. Взаимодействие кислорода с фотосенсибилизаторами происходит через процесс свободнорадикального окисления биологических макромолекул микроорганизмов, что приводит к их повреждению. Можно полагать, что выживание аэробных микроорганизмов в атмосфере кислорода связано со сложным взаимодействием между биологической генерацией свободных радикалов и способностью организма контролировать эти частицы. Контроль свободных радикалов кислорода осуществляется супероксидисмутазной и антиоксидантной системами клетки. Эти данные согласуются с концепцией отрицательного влияния кислорода как компонента внешней среды на энтомопатогенные микроорганизмы, что подтверждено экспериментами по интенсивной обработке кислородом спорокристаллического комплекса B. thuringiensis subsp. galleriae (штамм 69-6). Оказалось, что при этом количество живых спор уменьшается более чем на порядок, а процент гибели насекомых - тест-объектов снижается более чем вдвое [Штерншис, 1995]. При добавлении в обрабатываемую суспензию спор и кристаллов антиоксидантов как ингибиторов свободных радикалов сохранность биоагентов резко возрастала. В условиях высокой скорости подачи кислорода добавление антиоксиданта в концентрации 0,2% сохраняло споры и кристаллы. Эти опыты свидетельствуют о необходимости учета и данного экологического фактора. Игнорирование роли этого фактора в исследованиях энтомопатогенов связано с неочевидностью повреждений и традиционной оценкой кислорода как необходимого компонента в жизни аэробных микроорганизмов. В природе энтомопатогенные бактерии испытывают неблагоприятное воздействие кислорода в комплексе с другими факторами: температурой, влажностью, УФО. Под влиянием всех этих факторов могут быть созданы благоприятные условия запуска свободнорадикальных механизмов повреждения микроорганизмов. В этой связи уместно привести данные по влиянию углекислого газа на активность энтомопатогенных бактерий. При изучении действия атмосферного углекислого газа на активность B. thuringiensis, распределенных на листьях, в отношении насекомых, выявлена прямая зависимость от концентрации газа в воздухе [Coviella, Trumble, 2000]. По мнению авторов, при прогнозируемом в будущем увеличении концентрации СО2 в атмосфере повысится и эффективность энтомопатогенных бактериальных препаратов в полевых условиях. Эти результаты также находятся в согласии с концепцией влияния кислорода на микроорганизмы. К абиотическим факторам окружающей среды антропогенной природы относятся различные химические соединения, в том числе соли, химические инсектициды и другие агрохимикаты. Как правило, кратковременное воздействие их не оказывает влияние на энтомопатогены. В то же время нельзя полностью исключать отрицательного действия химикатов. Восприимчивость к энтомопатогену фитофага может зависеть от химического состава растения, на котором он питается. Еще до попадания в организм насекомого на патогены воздействуют фитонциды и другие биологически активные вещества, продуцируемые растениями. Одними из первых бактериостатическое и бактерицидное действие хвои на B. thuringiensis отметили сибирские ученые [Полтев, Печерская, 1967]. Авторы полагали, что фитонциды могут защищать насекомых от болезней, подавляя энтомопатогены, попадающие на растения. При нанесении на зерно пшеницы и кукурузы бактериального препарата наблюдали снижение активности d-эндотоксина и b-экзотоксина уже через 15 суток [Salama et al., 1996]. Учитывая отсутствие солнечного излучения и осадков, можно полагать, что ингибирующее влияние на токсины оказывали биологически активные вещества зерен. В то же время в опытах Н.В. Кандыбина [1989] по влиянию фитонцидов и экстрактов листьев тополя душистого, яблони и других плодовых культур на B. thuringiensis не обнаружено существенного влияния на бактерии этих растений. По другим данным, белок эндотоксина может инактивироваться танинами, экстракт листьев хлопка уменьшал его активность сильнее, чем экстракт хвои [Garczynski, Siegel, 2007]. Кроме того, и высокая (рН 1) и низкая (рН 11) кислотность поверхности листьев инактивирует белок токсина [Burges, Jones, 1998]. Изучены взаимодействия в системе триотрофа: разновидности капусты – капустная моль – B. thuringiensis. В качестве растительного субстрата использовали капусту белокочанную, цветную, китайскую и краснокочанную [Jafary et al., 2016]. B. thuringiensis наиболее активно подавлял численность гусениц моли при их питании на менее привлекательном растении (краснокочанная капуста) по сравнению с более привлекательным кормовым ресурсом (китайская капуста). Такая тенденция выявлена и в наших опытах [Андреева и др., 2013] по восприимчивости гусениц фитофагов к бактериальному препарату в зависимости от разновидности капусты. На менее благоприятном для развития насекомых растении-хозяине их восприимчивость к биопрепарату (B. thuringiensis subsp. kurstaki) была выше, хотя и варьировала в зависимости от численности в определенных условиях года. Такая зависимость подтверждается результатами ряда работ, где изучалось влияние растения-хозяина на эффективность B. thuringiensis в отношении насекомых-фитофагов [Meade, Hare, 1993; Janmaat, Myers, 2005]. Величина ЛК50 B. thuringiensis subsp. kurstaki, используемого против гусениц 3-го возраста лугового мотылька, значительно варьировала в зависимости от вида растения. Наименьшую ЛК50 отмечали при питании на свекле, в то время как на моркови значения были в 5,5-6,0 раза выше [Андреева, 2009]. При испытании B. thuringiensis subsp. kurstaki против гусениц Malacosoma disstria Hub., питающихся на разных субстратах, показано, что ЛК50 для личинок 3–го возраста была в 100 раз больше на тополе, чем на сахарном клене [Kouassi et. al., 2001]. Бактериальный токсин Cry1Ac при испытании против совки Helicoverpa armigera оказался более эффективным на растениях хлопчатника и сорго [Paramasiva et al., 2014]). Учет влияния кормового ресурса в системе триотрофа служит резервом повышения активности B. thuringiensis в контроле численности фитофагов. Влияние на энтомопатогенные бактерии и на течение инфекционного процесса оказывают представители эпифитной, почвенной и другой микрофлоры окружающей среды (биотические факторы). Например, при изучении влияния грибов рода Beauveria на B. thuringiensis subsp. dendrolimus выявлено подавляющее действие грибов на эту бактерию [Громовых, 1982]. Почва является экологической средой как для энтомопатогенов, поражающих наземных насекомых, но персистирующих там до встречи с объектом – мишенью, так и для энтомопатогенов, паразитирующих на почвообитающих насекомых. В почве патогены подвергаются действию уже рассмотренных абиотических и биотических факторов, исключая солнечное излучение. А.Я. Лесковой [1987] установлено существенное значение для сохранности энтомопатогенных бактерий типа почвы, а также показателя кислотности. Бактерии не размножались в почвах с низким рН и отмирали при рН 5,0-5,6. Бациллы сохранялись в почве около двух лет, причем у реизолятов через 2 года выявлены изменения физиолого-биохимических свойств. При инкубировании спор и кристаллов B. thuringiensis ssp. kurstaki в почве показано, что хорошая выживаемость спор через 2 недели пребывания в почве обусловлена их неспособностью прорастать в этой среде [Petras, Casida, 1985]. Очевидно, сохранность спор и кристаллов B. thuringiensis зависит от типа почвы, ее кислотности, влажности, почвенной микрофлоры. Около 90% кристаллов эндотоксина утрачивают токсичность в нестерильной почве в течение 1000 дней [West, Burges, 1985]. Время выживания в почве спор и кристаллов в основном составляет от нескольких дней до нескольких месяцев на глубине не более 10 см [Garszynsky, Siegel, 2007]. В целом бактериальные метаболиты меньше, чем споры, зависят от абиотических факторов окружающей среды (температура, влажность, УФО). Влияние всех описанных экологических факторов в сочетании, например, с повышенной плотностью популяции насекомого, может привести к возникновению эпизоотий. Процесс можно рассматривать как взаимодействие популяции патогенного паразита с популяцией его хозяина в конкретных условиях внешней среды. Чаще эпизоотии возникают в лесных биоценозах или в насаждениях многолетних культур. Эпизоотии, как уже отмечалось, являются источником выделения из погибших насекомых возбудителей болезней, которые и являются потенциальной основой биопрепаратов. Хотя в лесу наиболее распространены вирусные эпизоотии, именно при бактериальной эпизоотии сибирского шелкопряда Е.В. Талалаевым выделена бактерия – основа первого отечественного бактериального препарата дендробациллин. Многолетние исследования эпизоотий сибирского шелкопряда, вызванные B. thuringiensis, проводил В.С.Кулагин [1987]. По мнению автора, куколки сибирского шелкопряда представляют оптимальную экологическую среду для размножения и сохранения энтомопатогенных бацилл в лесном биоценозе. Хитиновая оболочка и размещение коконов с нижней стороны веток предохраняют размножившиеся микроорганизмы от УФ-облучения и смыва. Таким образом, абиотические и биотические факторы в большей степени влияют на биологические агенты по сравнению с химическими веществами – основой синтетических инсектицидов. Это отражается как на сохранности биоагентов при хранении и применении, так и на скорости действия на целевой объект. Поэтому многочисленные исследования направлены на преодоление нестабильной эффективности биопрепаратов, наблюдающейся в практике и мешающей часто увеличению доли их использования в управлении фитосанитарным состоянием биоценозов. Г л а в а 2 |
Похожие:
 |
Методическая разработка для студентов медицинских колледжей и училищ... Овладение знаниями и умениями по бактериологическому методу исследованию, освоение общих компетенций ок 1, ок 6, 7, 8, ок 12 |
|
Фамильная ветвь Фамилия имя рода или ветви рода. Рода имеют родоначальников в 10 12 веке, имена кланов (фамилии) как правило, пошли с тех давних... |
 |
Курсовая работа на тему: «Распространение микроорганизмов рода Clostridium... Получение ацетона и бутанола в ходе бактериального брожения представителей рода Сlostridium |
|
Форма выпуска Таблетки Состав Абактал синтетический противомикробный препарат из группы фторхинолонов. Оказывает бактерицидное действие, ингибируя репликацию ДНК... |
|
Морфологические свойства бактерий и методы их выявления Речкин А. И., Копылова Г. Е., Кравченко Г. А. Морфологические свойства бактерий и методы их выявления: Учебно-методическое пособие... |
|
Инструкция по применению питательного агара для выделения листерий палкам ... |
|
Инструкция по применению питательного агара для выделения листерий пал ... |
|
Благотворительность в зеркале сми Двери нашего центра открыты для всех. Практически все проводимые в центре мероприятия организованы на благотворительной основе. Благотворительность... |
|
Оао «Птицефабрика «Боровская» Документация Номер в плане закупок 51, 50 ... |
|
Обучающая программа по дисциплине Организация ЭВМ и систем содержание В авм для решения такого рода уравнений обычно используются электрические процессы, которые описываются (моделируются) такого же... |
|
Люси Истоки рода человеческого Перевод с английского канд биол наук... Восточной Африке, которые во многом изменили привычную картину происхождения и становления человеческого рода. Связанные с именами... |
|
Гуп рт «республиканский информационно-вычислительный центр» информационно-консультационный центр Биопрепараты комплексного действия повышают продуктивность и защищают растения от болезней |
|
На художественном абонементе представлена подборка книг «Ожидание... «Ожидание обезьян». Это своего рода литературное путешествие накануне нового года – Года обезьян. Цель подборки познакомить читателя... |
|
Рекомендации по эксплуатации и применению Воздействие на организм «мёртвой» воды Подавляет развитие болезнетворных бактерий, вирусов, возбудителей грибковых заболеваний |
|
Методические указания по выявлению бактерий Legionella Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г. Ф. Лазикова, Ю. М. Федоров) |
|
Прокофьев Евгений Сергеевич Содержание представителей рода Mycobacterium... Содержание представителей рода Mycobacterium в воде и обрастаниях аквариумов с замкнутой системой очистки воды |