Литература медицинских вузов для студентов руководство к практаческим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии

Тема 10.2. МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ (СЕРОДИАГНОСТИКА) Количество специфических антител в сыворотке крови можно определить методами непосредственного выявления связывания со специфическим антигеном. Два наиболее совре­менных метода серологических исследований: радиоиммунный и иммуноферментный. В любом случае нужен известный очи­щенный антиген, к которому прикрепляется метка: радионук-лидная или ферментная. Соответственно связывание меченого антигена с антителами учитывается радиометрическим или спек-трофотометрическим методом. Кроме методов непосредственного выявления связывания антител с антигеном, используют серологические исследова­ния, основанные на изменении свойств антигена: реакции агглютинации, преципитации, иммунного лизиса, связывания комплемента, нейтрализации. План Программа Методы непосредственного выявления связывания ан­тигена с антителами: радиоиммунный метод, иммуно­ферментный метод, иммунофлюоресцентный метод. Методы связывания антигена с антителами, проявля­ющегося изменением свойств антигена: реакция агг­лютинации, реакция преципитации, реакции иммун­ного лизиса, реакция связывания комплемента, реак­ции нейтрализации. Демонстрация 1. Диагностические препараты для выявления антител (диагностикумы). Задание студентам Протоколировать и оценить результаты развернутой реакции агглютинации, поставленной с целью опре­деления титра специфических антител в исследуемой сыворотке. Протоколировать и оценить результаты РИГА, постав­ленной с целью серодиагностики. Протоколировать и оценить результаты реакции преци­питации в геле, поставленной с целью серодиагностики. Протоколировать и оценить результаты титрования ком­племента с целью расчета рабочей дозы комплемента. Протоколировать и оценить результаты реакции свя­зывания комплемента (РСК), поставленной с целью серодиагностики. Протоколировать и оценить результаты реакции Кумбса, поставленной с целью определения титра непол­ных антител в исследуемой сыворотке. Протоколировать и оценить результаты иммуноферментного анализа с целью выявления специфических антител в исследуемых сыворотках. Протоколировать и оценить результаты реакции флоккуляции, поставленной с целью титрования антиток­сической сыворотки. Протоколировать и оценить результаты антистрептолизиновой реакции, поставленной с целью серодиагностики ревматизма. 10. Протоколировать и оценить результаты РТГА, постав­ленной с целью серодиагностики вирусной инфекции. Сделать заключение по результатам каждой серологи­ческой реакции. Методические указания Для приготовления сыворотки взятую из вены кровь в коли­честве 3—4 мл помещают в термостат при 37 °С на 10—15 мин. После свертывания крови сгусток отслаивают от стенок пробир­ки стеклянной палочкой и выдерживают при 4 °С в течение часа для лучшей ретракции сгустка и более полного отделения сы­воротки. Затем сыворотку осторожно отсасывают пипеткой. 1. Радиоиммунный метод. Количество специфических анти­тел в исследуемом образце можно определить, используя вари­ант конкурентного связывания: по их способности ингибиро-вать связывание радиоактивно меченных антител со специфи­ческим антигеном, фиксированным на твердой фазе. Но чаще используют метод выявления связавшихся с антигеном на твер­дой фазе специфических антител с помощью радиоактивно меченных антииммуноглобулиновых антител, специфичных к константной области молекулы иммуноглобулина. Проще все­го получить антииммуноглобулиновую сыворотку путем имму­низации животных одного вида иммуноглобулинами живот­ного другого вида. Такая антииммуноглобулиновая сыворотка будет связывать любые молекулы иммуноглобулинов соответ­ствующего вида (мышей, кроликов или других видов). Такую меченную радионуклидами антииммуноглобулиновую сыво­ротку против иммуноглобулинов человека используют в РИА для выявления связывания немеченых человеческих антител на фиксированном антигене. Эта антииммуноглобулиновая сыво­ротка "распознает" антитела разной специфичности, связыва­ясь с антигенными эпитопами в константной части молекул. Используя РИА или ИФА, можно определить не только количество антигенспецифических антител, но и принадлеж­ность этих антител к тому или иному изотипу иммуноглобули­нов. Для этого используют антииммуноглобулиновые антитела, специфичные для отдельных изотипов иммуноглобулинов. Получение таких антииммуноглобулиновых антител начинается с иммунизации животного очищенным препаратом одного из изотипов иммуноглобулинов. Из полученной иммунной сыво­ротки путем многократной абсорбции удаляют все антитела, перекрестно реагирующие с иммуноглобулинами других изо­типов. Полученные антиизотипические антитела используют для определения количества антител каждого из изотипов в иммунной сыворотке, реагирующей с антигеном. Особая роль отводится антителам против IgE, которые позволяют опреде­лить количество иммуноглобулинов этого изотипа и специфи­ческих антител, относящихся к этому изотипу, при лаборатор­ной диагностике аллергических реакций анафилактического типа и атонических заболеваний. Иммуноферментный анализ. Одним из наиболее чувстви­тельных методов выявления антител считается ИФА, который не уступает по чувствительности РИА и в то же время отлича­ется от него большей доступностью для обычных диагности­ческих лабораторий. Специфический антиген адсорбируют на поверхности лунок в пластинах из полистирола (поливинилхлорида). Фиксированный на пластине антиген инкубируют с испытуемыми человеческими сыворотками. После отмывания от несвязавшихся белков связанные иммобилизованными ан­тигенами иммуноглобулины выявляют с помощью антивидовой (античеловеческой) антииммуноглобулиновой сыворотки, меченной ферментом пероксидазой. После инкубации с суб­стратом (пероксидом водорода) и индикатором оценивают фер­ментативную активность по интенсивности окраски. Интен­сивность окраски, пропорциональную количеству сорбирован­ных на антигене антител, можно оценить визуально или с помощью спектрофотометра. В данной модификации удобна универсальность меченого реагента, который позволяет выяв­лять антитела к разным антигенам. Иммуноэлектрофорез. Для выявления антител, специфи­ческих по отношению к отдельным антигенным компонентам в составе сложной смеси, например к отдельным антигенам микроорганизмов, приходится прибегать к методам выделения белков из смеси. Одним из наиболее популярных методов выделения белков является электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE) в присутствии додецилсульфата натрия (SDS), который получил сокращенное обозначение: SDS-PAGE. Бел­ковые фракции распределяются в геле в соответствии с их размерами. После этого разделенные в электрофоретическом поле белки переносят на нитроцеллюлярную пластину, где они обрабатываются специфической антисывороткой. Положение белков, с которыми связываются специфические антитела, вы­является с помощью антииммуноглобулиновых антител, ме­ченных ферментом или радионуклидом. Этот метод получил название Western blot и используется в качестве уточняющего при выявлении в сыворотке крови антител против вируса им­мунодефицита человека. Для этого белки вируса разделяют с помощью SDS-PAGE, разделенные белки переносят на плас­тину нитроцеллюлозы и проводят инкубацию с испытуемой сывороткой. Антитела из сыворотки связываются с разными антигенными фракциями, что выявляется с помощью фер-ментно-меченой антииммуноглобулиновой сыворотки против иммуноглобулинов человека. 4. Иммунофлюоресцентный метод. Используется, например, в серодиагностике сифилиса. Мазок из взвеси T.pallidum на стекле обрабатывают исследуемой сывороткой, в которой по­дозревается присутствие специфических антител. Если в сыво­ротке имеются антитела против антигенов спирохеты, они свя­зываются с микробом. Избыток антител удаляют отмыванием. Мазок дополнительно обрабатывают флюоресцирующей сыво­роткой против человеческих иммуноглобулинов. О выявлении специфических антител в исследуемой сыворотке будет свиде­тельствовать обнаружение светящихся спирохет при люмине­сцентной микроскопии мазка. Аналогичным методом выявляют антинуклеарные антитела (антитела против ДНК) в сыворотке крови при ряде аутоим­мунных заболеваний, используя в качестве антигена ядерные клетки животного происхождения. 5. Реакция развернутой агглютинации. Сначала готовят основное разведение сыворотки, из которого делают серию раз­ведений путем последовательного переноса 1 мл из предыду­щей пробирки в следующую пробирку ряда. Из последней пробирки 1 мл разведенной сыворотки удаляют для сохранения одинакового объема. В контрольную пробирку (контроль анти­ гена) вносят 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. В каждую пробирку с разведениями сыворотки и в контроль­ную пробирку вносят пастеровской пипеткой по 2 капли взвеси бактерий, содержащей 3 млрд микробных тел в 1 мл. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 °С на 2 ч, затем сутки выдерживают при комнатной температуре. Учет реакции развернутой агглютинации производят, оценивая последователь­нл каждую пробирку, начиная с контрольных, при осторожном сшвании. В контрольных пробирках агглютинации не должыть. Интенсивность реакции агглютинации отмечают следу-ми знаками: "++++" — полная агглютинация (хлопья агг-F "1л|бтината в абсолютной прозрачной жидкости), "+++" — непол­на Ля агглютинация Схлопья в слабоопалеспигпто] * агглютинация (хлопья в слабоопалесцирующей жидкости), jt (*f+" — частичная агглютинация (хлопья четко различимы, жид­кость слегка мутная), "+" — слабая , сомнительная агглютинация (жидкость очень мутная, хлопья в ней плохо различимы), "—" — отсутствие агглютинации (жидкость равномерно мутная) (рис. 10.2.1). За титр сыворотки принимают последнее ее разведение, в Как правило, в центральную лунку заливают стандартный раствор антигена, а в периферические — испытуемые сыворот­ки. В одну из периферических лунок вносят стандартную им­мунную сыворотку соответствующей специфичности, а в дру­гую — нормальную сыворотку для контроля. Антиген с сыво­ротками инкубируют во влажной камере при 37 "С в течение 24 ч, после чего учитывают количество и ширину полос пре­ципитации между центральной лункой с раствором антигена и лунками с исследуемыми сыворотками. 8. Реакция лизиса. Реакция связывания комплемента. Для постановки реакции лизиса и РСК используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок. Ге­молитическая активность комплемента термолабильна и пол­ностью утрачивается при прогревании сыворотки в течение 30 мин при 56 СС. При адсорбции комплемента на комплексе антиген—антитело его действие проявляется реакцией лизиса антигена, если антиген корпускулярный, или не сопровожда­ется видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учета результатов РСК вводят вспо­могательную (индикаторную) гемолитическую систему. Она со­стоит из взвеси эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика, полу­ченной путем его иммунизации упомянутыми эритроцитами. Положительная РСК характеризуется задержкой гемолиза вслед­ствие адсорбции комплемента системой антиген—антитело (рис. 10.2.3). Отрицательная РСК характеризуется наличием гемолиза, поскольку свободный комплемент связывается с ин­дикаторной системой антиген—антитело, т.е. эритроциты ба­рана — гемолитическая сыворотка кролика. РСК обладает вы­сокой чувствительностью и специфичностью, что позволяет использовать ее для серодиагностики многих заболеваний. Для постановки РСК требуется точное определение коли­чественных соотношений всех ингредиентов, участвующих в реакции: исследуемой сыворотки, антигена, комплемента, ге­молитической сыворотки кролика и эритроцитов барана. По­этому постановке основного опыта предшествует титрование гемолитической сыворотки и выбор ее рабочего разведения, титрование других ингредиентов. Постановка РСК должна сопровождаться контролями для проверки отсутствия антикомплементарных ингредиентов в препаратах антигенов и в исследуемой сыворотке. Антиком­плементарные свойства антигенов или сыворотки могут быть связаны с присутствием в их составе денатурированных или агрегированных иммуноглобулинов, гепарина, оксидантов, мик­робных контаминант. Эти компоненты могут либо связывать комплемент, либо связывать и удалять ионы кальция или магния, необходимые для комплементопосредованного гемо­лиза. Манипуляции Номера пробирок 123456789 Внесение ком- 0,3 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 — — племента в раз­ведении 1:5 мл Внесение изото- 0,3 0,4 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,2 — нического раст­вора хлорида натрия, мл Удаление из 0,4 0,4 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 — — пробирки из­бытка, мл Получаемые 1:10 1:15 1:20 1:25 1:30 1:35 1:40 - -разведения ком­племента Добавление ге- 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 молитической смеси, мл Инкубация 390 мин при температуре 37 "С Учет результатов Манипуляции Номера пробирок 1234567 Внесение испытуемой сыво- 0,2 — — 0,2 — — — ротки в разведении 1:5, мл Внесение заведомо "поло- — 0,2 — — — — — жительной" сыворотки, мл Внесение заведомо "отри- — — 0,2 — — — — дательной" сыворотки, мл Внесение антигена, мл 0,2 0,2 0,2 — 0,2 — — Манипуляции Номера пробирок 1234567 Внесение изотонического — — — 0,2 0,2 0,4 0,4 раствора хлорида натрия, мл Внесение комплемента в ра- 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 бочей дозе, мл Инкубация при 0—4 "С в течение 18—20 ч или при 37 °С в течение 30 мин Добавление гемолитической 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 смеси, мл Инкубация при 37 °С в течение 20—30 мин Учет результатов Манипуляции Номера пробирок 1234567 Внесение раствора токсина, 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 содержащего 20 Lf в 1 мл, мл Внесение исследуемой сы- 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 — 0,6 воротки, мл Инкубация при 45 "С в течение 30 мин Учет результатов по иници­альной флоккуляции Тесты Выявляемое количество, мкг/мл антител антигенов Преципитация 20,0 1,0 Иммуноэлектрофорез 20,0 Связывание комплемента 0,5 Радиальная иммунодиффузия 0,05 0,5 Агглютинация бактерий 0,01 Гемолиз 0,01 Непрямая (пассивная) гемагглю- 0,01 тинация Ингибиция гемагглютинации 0,001 Нейтрализация токсина 0,01 Радиоиммунный анализ 0,0005 0,000005 Иммуноферментный анализ 0,0005 0,000005 Нейтрализация вирусов 0,000005 Тема 10.3. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА Иммунный статус человека складывается из комплекса не­специфических и специфических механизмов, обеспечиваю­щих антибактериальную, противовирусную и противоопухоле­вую защиту организма. К механизмам неспецифической защи­ты против бактерий относятся фагоцитоз гранулоцитами и моноцитами/макрофагами и активация системы комплемента по альтернативному пути. Макрофаги не только захватывают и убивают бактерии, но при контакте с ними продуцируют и секретируют биологически активные молекулы — цитокины, запускающие неспецифический защитный процесс воспале­ния. Механизмы неспецифической противовирусной и проти­воопухолевой защиты: клетки — естественные киллеры и мо­лекулы семейства интерферонов. Специфическую антибакте­риальную защиту против внеклеточно паразитирующих бакте­рий обеспечивают специфические антитела — иммуноглобули­ны путем усиления фагоцитоза (опсонизация) или активации системы комплемента по классическому пути иммунными комплексами. Специфическая защита от бактериальных токси­нов является функцией специфических антитоксических анти­тел — иммуноглобулинов, способных нейтрализовать экзоток­сины бактерий. Специфическую защиту против внутриклеточ-но паразитирующих микроорганизмов берут на себя активиро­ванные Т-лимфоциты и макрофаги, продуцирующие цитоки­ны: интерлейкины, гамма-интерферон, фактор некроза опухо­ли, обеспечивая при этом развитие в очаге инфекции реакции иммунного воспаления — гиперчувствительности замедленно­го типа (ГЗТ). Специфическую противовирусную защиту обес­печивают активированные цитотоксические лимфоциты (CTL), способные распознать инфицированную клетку и убить ее при непосредственном контакте. В специфической противовирус­ной защите велика роль специфических антител иммуноглобу­линов, которые могут нейтрализовать внеклеточные вирусы или вызвать гибель инфицированных вирусом клеток посред­ством антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦТ) естественных киллеров и других клеток. Оценка иммунного статуса включает количественную и ка­чественную оценку основных факторов неспецифической за­щиты (фагоцитирующих клеток, системы комплемента, есте­ственных киллеров, системы интерферонов) и основных зве­ньев иммунной системы: Т-лимфоцитов и их главных конеч­ных продуктов — цитокинов; В-лимфоцитов и их главных ко­нечных продуктов — иммуноглобулинов. Количественная оценка клеточных популяций начинается на этапе клинического анализа крови, который дает информа­цию о количестве циркулирующих в крови гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов. Дальнейшая дифференцировка лим­фоцитов основывается на наличии у них так называемых по­верхностных маркеров, т.е. особых молекул (их принято обо­значать "CD" — сокращение от английского термина "clusters of differentiation") в составе клеточных мембран, которые в качестве антигенов выявляются при взаимодействии со специ­фическими моноклональными антителами. Качественная (функциональная) оценка клеточных популя­ций и субпопуляций проводится с помощью соответствующих функциональных тестов: у Т- и В-лимфоцитов оценивают про-лиферативный ответ на контакт со стандартными митогенами или микробными антигенами (реакция бласттрансформации лимфоцитов — РБТЛ) или ответ продукцией цитокинов на кон­такт с митогеном. У фагоцитирующих клеток оценивают функ­цию фагоцитоза: активность захвата стандартных частиц — объ­ектов фагоцитоза, бактерицидность фагоцитов косвенно оце­нивается по высоте окислительного взрыва, индуцированного фагоцитозом (НСТ-тест). Концентрацию молекул иммуногло­булинов четырех основных изотипов — классов (IgG, IgM, IgA, IgE) в сыворотке крови и в других биологических жидкостях (слюна, спинномозговая жидкость и др.) определяют, пользу­ясь наборами специфических моноклинальных антител, полу­ченных против изотипспецифических антигенов этих иммуно­глобулинов. С помощью наборов таких антител можно прово­дить реакцию комплексообразования (иммуноглобулины, при­сутствующие в сыворотке крови, выполняют в этой реакции функцию антигенов), результаты которой поддаются количест­венному учету с помощью нефелометра или спектрофотометра. Другой вариант учета — проведение твердофазного иммуно-ферментного анализа с участием тех же изотипспецифических моноклональных антител и антииммуноглобулиновой мечен­ной пероксидазой сыворотки против иммуноглобулинов мыши (так как все моноклональные антитела получены из клеток мышей). План Программа Изучение методов оценки факторов неспецифической защиты организма. Изучение методов оценки Т-системы иммунитета. Изучение методов оценки В-системы иммунитета. Демонстрация Характерная морфология гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов в мазке крови, окрашенном по методу Романовского-Гимзы. Отдельные стадии фагоцитоза бактерий и дрожжеподобных грибов рода Candida макрофагами и гранул о-цитами. 134 Задание студентам Произвести микроскопический учет фагоцитоза час­тиц латекса лейкоцитами крови. Рассчитать показате­ли активности фагоцитирующих клеток. Протоколировать и оценить результаты определения гемолитической активности комплемента сыворотки крови. По готовым результатам выявления поверхностных маркеров на мембранах мононуклеарных лейкоцитов крови рассчитать показатели относительного и абсо­лютного количества естественных киллеров, В-лимфоцитов, Т-лимфоцитов, их субпопуляций в крови и сопоставить с интервалами колебаний этих показате­лей у здоровых лиц. По готовым результатам иммуноферментного опреде­ления содержания в сыворотке крови иммуноглобули­нов разных изотипов (IgG, IgM, IgA, IgE) сделать за­ключение, сопоставив эти результаты с интервалами колебаний этих показателей у здоровых лиц. Обосновать выбор специальных тестов для характеристики функций иммунокомпетентных клеток. Методические указания 1. Методы оценки фагоцитирующих клеток крови. Образец крови или лейковзвеси инкубируют с бактериями или другими объектами фагоцитоза (частицы латекса, полистиреновые час­тицы) в течение 1—2 ч, после чего из этой смеси приготавли­вают мазок, окрашивают по методу Романовского—Гимзы и микроскопируют, подсчитывая 100 клеток для определения процента фагоцитирующих клеток и количества бактерий (час­тиц), захваченных этими клетками (рис. 10.3.1; на вклейке). В норме процент фагоцитирующих лейкоцитов колеблется от 40 до 80 %, а количество захваченных частиц на 1 клетку — от 1 до 5. В качестве косвенного показателя бактерицидности фагоци­тирующих клеток оценивают интенсивность окислительного взрыва в фагоцитах по способности восстанавливать желтый краситель нитросиний тетразолий (НСТ) с формированием в цитоплазме клеток осадка темно-синего формазана. Чем ак­тивнее окислительный взрыв в фагоцитах, тем большая доля клеток содержит осадок формазана. После подсчета клеток доля формазан-положительных выражается в процентах. При инкубации лейкоцитов здоровых лиц только с красителем без индуктора окислительного взрыва доля формазан-положитель­ных клеток не превышает 1—2 %. При инкубации лейкоцитов здоровых лиц в присутствии индуктора окислительного взрыва (объекты фагоцитоза, бактериальный липополисахарид или полисахарид) все 100 % фагоцитов могут ответить окислительным взрывом и накоплением осадка формазана. Снижение доли формазан-положительных клеток свидетельствует о де­фектности кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов. 2. Методы определения количества лимфоцитов в крови. Изу­чение лимфоцитов начинается с их выделения из крови. Мо-нонуклеарные лейкоциты (лимфоциты, моноциты) отделяют от других клеток крови (гранулоцитов и эритроцитов) с помощью центрифугирования в градиенте плотности специальной смеси препаратов: фикол, верографин. Взятая из вены кровь смеши­вается с антикоагулянтом, вносится в пробирку с названной смесью и центрифугируется. Имеющие большую плотность эритроциты и гранулоциты образуют осадок на дне пробирки, а мононуклеарные клетки образуют кольцо на поверхности градиентной смеси, откуда могут быть перенесены в отдельную пробирку и отмыты от градиентной смеси. Все зрелые лимфоциты имеют одинаковую морфологию: малых лимфоцитов с плотным ядром и узким ободком цито­плазмы. Дифференцировка популяций и субпопуляций лимфо­цитов связана с выявлением поверхностных маркеров — осо­бых для каждого типа клеток антигенов с помощью соответст­вующих специфических антител. Естественные киллеры несут поверхностный маркер CD16. Все Т-лимфоциты (тотально) несут поверхностный маркер CD3. Т-лимфоциты делятся на субпопуляции: Т-хелперы несут маркер CD4, а цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) несут маркер CD8. Все В-лимфоциты несут поверхностный маркер CD19. В-лимфоциты несут на поверхностной мембране поверх­ностные иммуноглобулины, которые могут быть выявлены в качестве антигенов с помощью флюоресцирующих антиимму-ноглобулиновых антител (в том числе — против отдельных изо-типов иммуноглобулинов). Эти поверхностные иммуноглобу­лины также рассматриваются как поверхностные маркеры В-лимфоцитов. Определение количества лимфоцитов разных популяций и субпопуляций по поверхностным маркерам проводится с по­мощью двух разных вариантов методов: люминесцентной или световой микроскопии мазков цельной крови или взвеси мононуклеаров, обработанных соответствующими моноклональными антителами, ме­ченными флюорохромом или ферментом; автоматического подсчета клеток с использованием про­точного цитофлюориметра (рис. 10.3.2). При использовании первого методического варианта важно получить видимый осадок комплексов антител с красителем на поверхности клетки. Этот метод очень трудоемкий и длительный. Подсчет количества основных субпопуляций лимфоцитов данным методом занимает неделю. Клетки ниже порога флюоресценции Клетки выше порога флюоресценции Рис. 10.3.2. Подсчет лимфоцитов разных популяций и субпопуляций с помощью проточного цитофлюориметра. В отличие от этого с помощью автоматизированного под­счета с использованием современного прибора — проточного цитофлюориметра — это удается сделать за один день. Образец цельной крови инкубируют с моноклональными антителами, меченными флюоресцентным красителем, пропускают через тонкую трубочку, на выходе из которой формируется струя из капель. Многие из них содержат только по одной клетке. Каждая капля проходит перед лазерным лучом. Если капля содержит клетку, клетка вызывает отклонение лазерного луча, а лазерный луч возбуждает свечение флюорохрома в молекуле антитела, связанного с антигеном на поверхности клетки (с поверхностным маркером). Чувствительный фотоумножитель Популяции Поверх- % от всего Абсолютное количе-и субпопуляции костные количества ство клеток х 109 лимфоцитов маркеры лимфоцитов в 1 л крови Лимфоциты (всего) 100 1,50—3,50 В-лимфоциты CD19 15 (10-25) 0,30-0,90 Т-лимфоциты (всего) CD3 75 (60-90) 1,00—2,50 Т-лимфоциты/хелперы CD4 50 (32—65) 0,50—1,60 Т-лимфоциты/киллеры CD8 25 (16-39) 0,30—0,90 Естественные киллеры CD16 10 (5-15) 0,20—0,30 Изотип Обозна- % от всех Количество иммуногло- иммуноглобулина чение иммуно- булинов, г/л глобули- 1 нов сыво- средние интервалы ротки величины колебаний Иммуноглобулин G IgG 70—75 12,0 7,50—15,50 Иммуноглобулин М IgM 8—10 1,2 0,65—1,65 Иммуноглобулин A IgA 15—20 2,0 1,25—2,50 Иммуноглобулин Е IgE 0,005 0,0005 0—0,0005

Похожие:

	Литература для студентов медицинских вузов акушерство Рекомендовано Департаментом научно-исследовательских и образовательных медицинских учреждений Министерства здравоохранения Российской...		Рабочая программа учебной дисциплины клиническая иммунология и аллергология... Рабочая программа составлена на основании: Программы по микробиологии, вирусологии, иммунологии для лечебных, медико-профильных и...
	Рабочая программа учебной дисциплины клиническая иммунология Для... Рабочая программа составлена на основании: Программы по микробиологии, вирусологии, иммунологии для лечебных, медико-профильных и...		H. В. Прозоркина, П. А. Рубашкина Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии Санитарно-микробиологическое исследование объектов окружающей среды в лечебно-профилактических учреждениях
	Литература в библиотеке ми пгу основная литература Детские болезни А. А. Бар Пропедевтика детских болезней Мазурин 2001г 1 шт. – читальный зал Баранова, Г. А. Лыскиной для студентов...		Учебник для студентов медицинских вузов Учебник содержит тестовый контроль знаний по психотерапии и список рекомендуемой литературы. Для студентов медицинских вузов и врачей...
	Учебник для вузов Рекомендовано Учебно-методическим объединением... Дудникова Э. В. — профессор кафедры детских болезней по ростовского государствен­ного медицинского университета, доктор медицинских...		Руководство к лабораторным занятиям по гигиене детей и подростков... Учебное пособие предназначено для студентов медицинских вузов по специальности «Лечебное дело» ипрактикующих врачей
	Коркина М. В. К66 Психиатрия: Учебник для студ мед вузов / М. В.... Учебник предназначен для студентов медицинских вузов, работаю­щих психиатров, психотерапевтов, медицинских психологов и специали­стов...		И стерилизация Рецензенты: доц каф микробиологии, вирусологии и иммунологии, канд мед наук Н. Ф. Казак; зав лабораторией индикации возбудителей...
	Неинфекционные заболевания кожи учебно-методические указания к практическим... Зав кафедрой дерматовенерологии гбоу впо «Кубгму» Минздрава России, профессор, д м н		Литература для студентов медицинских вузов (авторы) сборник тестов по биохимии В сборнике представлены тесты по биохимии, составленные в полном соответствии с теоретическим материалом по курсу «Биохимии», рекомендованному...
	Практических занятий по медицинской микробиологии Руководство по организации и проведению практических занятий по медицинской микробиологии /Под ред акад. Рамн о. В. Бухарина. Екатеринбург,...		Учебник для медицинских вузов и медицинских специалистов Серия «xxi век» Учебник предназначен для студентов медицинских муювi-ii курсов, продолжающих изучение английского языка
	Руководство по статистическому анализу деятельности лечебно-профилактических учреждений Руководство предназначено для руководителей органов и учреждений здравоохранения, врачей всех клинических специальностей, врачей-статистиков...		Руководство состоит из двух частей. Часть первая «Общая онкология» Руководство предназначено для нефрологов, врачей-терапевтов, студентов старших курсов медицинских вузов, а также клинических интернов...